Page 30 - 《中国药房》2024年3期
P. 30

2.4.2 转染 miRNA-21 模拟物/抑制剂对细胞中 PI3K/                 与空白组[（23.60±0.03）%]比较，模型组大鼠肝组织中
          Akt信号通路相关mRNA及其蛋白表达的影响                              胶原百分比[（42.80±0.01）%]显著升高（P＜0.01）；与模
              取对数生长期 HSC-T6 细胞，接种至 24 孔板中（每                   型组比较，蓝盆花醇提物低、中、高剂量组大鼠肝组织中
                 5
                        5
          孔 1×10 ～5×0 个细胞），实验设置 miRNA-21 模拟物                  胶原百分比[分别为（34.90±0.06）%、（32.30±0.04）%、
          组、miRNA-21 模拟物 NC 组、miRNA-21 抑制剂组和                 （28.50±0.02）%]均显著降低（P＜0.01）。
          miRNA-21抑制剂NC组，每组设置5个复孔。各组的转                        3.1.2 大鼠肝组织中HF指标及PI3K/Akt信号通路相关
          染方法如下：当各组细胞在常规培养后密度为30%～50%                         mRNA表达的测定结果
          时，分别加入 miRNA-21 模拟物（50 nmol/L）、miRNA-21                 与 空 白 组 比 较 ，模 型 组 大 鼠 肝 组 织 中 α -SMA、
          模拟物NC（50 nmol/L）、miRNA-21抑制剂（100 nmol/L）、           Collagen Ⅰ、PI3K和Akt的mRNA表达水平均显著升高
          miRNA-21 抑制剂 NC（100 nmol/L）混合液，继续培养
                                                             （P＜0.01），PTEN 的 mRNA 表 达 水 平 显 著 降 低（P＜
          48 h。分别按照“2.3.4”“2.3.5”项下方法提取和测定各组细
                                                              0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠肝组织中 α-SMA、
          胞中PI3K/Akt信号通路相关mRNA及其蛋白的表达水平。
                                                              Collagen Ⅰ、PI3K、Akt 的 mRNA 表达水平均显著降低
          2.5 统计学方法
                                                             （P＜0.01），PTEN 的 mRNA 表达水平均显著升高（P＜
              采用Graphpad Prism 8软件进行数据统计分析及作
                                                              0.01）。结果见表2。
          图。满足正态分布和方差同质性检验的计量资料以x±s
                                                              表2 各组大鼠肝组织中HF指标及PI3K/Akt信号通路
          表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较
                                                                   相关mRNA的表达水平比较（x±s，n＝10）
          采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
                                                              组别            α-SMA  Collagen Ⅰ  PI3K  Akt  PTEN
          3 结果                                                空白组          1.00±0.00  1.00±0.00  1.00±0.00  1.00±0.00  1.00±0.00
          3.1 体内动物实验结果                                        模型组          2.82±0.27 a  2.92±0.22 a  1.82±0.33 a  2.18±0.32 a  0.39±0.02 a
                                                              蓝盆花醇提物低剂量组   1.08±0.44 b  1.18±0.12 b  0.86±0.10 b  1.18±0.24 b  1.76±0.16 b
          3.1.1 大鼠肝组织病理变化观察结果                                 蓝盆花醇提物中剂量组   1.42±0.26 b  1.60±0.37 b  1.13±0.18 b  1.22±0.13 b  1.64±0.32 b
              HE 染色结果显示，空白组大鼠肝组织中肝细胞核                         蓝盆花醇提物高剂量组   1.03±0.08 b  1.20±0.23 b  1.05±0.18 b  1.14±0.17 b  1.76±0.30 b
          大而圆，肝细胞排列均匀，无脂肪变性和纤维组织增生。                              a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01。
          模型组大鼠肝组织中实质细胞减少，ECM过度沉积，肝                           3.1.3 大鼠肝组织中HF指标及PI3K/Akt信号通路相关
          细胞排列不规则，有大量的炎症细胞浸润。与模型组比                            蛋白表达的测定结果
          较，各给药组大鼠肝组织中纤维组织增生、炎症细胞浸                                与 空 白 组 比 较 ，模 型 组 大 鼠 肝 组 织 中 α -SMA、
          润及纤维化程度均得到一定改善。结果见图1。                               Collagen Ⅰ、PI3K、Akt蛋白的表达水平均显著升高（P＜
              Masson染色结果显示，空白组仅有少量胶原出现在                       0.01），PTEN 蛋白的表达水平显著降低（P＜0.01）；与模
          汇管区；而模型组大鼠肝组织有大量胶原纤维沉积，且                            型组比较，各给药组大鼠肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、
          出现较多纤维间隔；各给药组大鼠肝组织中胶原纤维明                            PI3K、Akt蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.01），PTEN蛋
          显减少，纤维间隔变窄，详见图 2。统计分析结果显示，                          白的表达水平均显著升高（P＜0.01）。结果见图3、表3。








                         100 μm              100 μm               100 μm              100 μm             100 μm
                 A.空白组               B.模型组          C.蓝盆花醇提物低剂量组        D.蓝盆花醇提物中剂量组        E.蓝盆花醇提物高剂量组
             注：红色剪头所指的是肝细胞排列紊乱；黄色剪头所指的是炎症细胞浸润；黑色剪头所指的是脂肪细胞变性。
                                          图1 各组大鼠肝组织的HE染色显微图








                          100 μm             100 μm              100 μm              100 μm              100 μm
                 A.空白组               B.模型组          C.蓝盆花醇提物低剂量组        D.蓝盆花醇提物中剂量组        E.蓝盆花醇提物高剂量组
             注：红色剪头所指的是胶原沉积部位。
                                         图2 各组大鼠肝组织的Masson染色显微图


          · 280 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3                               中国药房  2024年第35卷第3期
   25   26   27   28   29   30   31   32   33   34   35