Page 28 - 《中国药房》2024年3期
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protein  expressions  of  PTEN （P＜0.01）；  after  transfection  with  miRNA-21  inhibitor，  the  changes  of  above  indexes  were  opposite
          to  the  above  results （P＜0.01）.  CONCLUSIONS  Alcoholic  extracts  of  S.  comosa  may  inhibit  the  PI3K/Akt  signaling  pathway  by
          affecting the expression of miRNA-21， so as to achieve the effect of anti-hepatic fibrosis.
          KEYWORDS     alcoholic extract from Scabiosa comosa； hepatic fibrosis； PI3K/Akt signaling pathway； PTEN； miRNA-21



              肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是指肝脏受到损伤               有限责任公司，由内蒙古医科大学蒙医药学院蒙药炮制
          或异常刺激时发生的一种病理性改变，其最显著的病理                            实验中心主任呼日乐巴根教授鉴定为真品；苏木素-伊
          特征是细胞外基质（extracellular matrix，ECM）过度沉               红（HE）染色液（批号 BA4099）购自珠海贝索生物技术
          积 [1―2] 。已有研究证实，在肝脏损伤的情况下，肝星状细                      有 限 公 司 ；SDS-PAGE 凝 胶 配 制 试 剂 盒（ 批 号
          胞（hepatic stellate cell，HSC）活化转变为肌成纤维细胞，            20210727）、Masson 染色试剂盒（批号 2109001）均购自
          α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、胶            北京索莱宝科技有限公司；miRNA-21 模拟物、模拟物
          原蛋白Ⅰ（collagen type Ⅰ，Collagen Ⅰ）和 Collagen Ⅲ        NC（阴性对照）（批号均为 20210813010），miRNA-21 抑
                                       [3]
          表达量增加，进而导致 HF 的发生 。有研究发现，微小                         制 剂 、抑 制 剂 NC（ 阴 性 对 照 ）（ 批 号 均 为
          RNA-21 （miRNA-21）可通过靶向磷酸酶及张力蛋白同                     PA20210813010）和 转 染 试 剂 riboFECT CP（ 批 号
                                                                                                  TM
          源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chro‐  W0728）均购自广州锐博生物技术有限公司；FastKing
          mosome ten，PTEN）调控磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B                 cDNA 第一链合成试剂盒（批号 Y1302）、SuperReal 荧光
         （phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt）信
                                                              定量预混试剂（批号s8129）均购自天根生化科技（北京）
          号通路，即通过上调 PTEN 表达抑制 PI3K/Akt 信号通                    有限公司；兔源α-SMA、Collagen Ⅰ、PTEN、PI3K、Akt单
                                  [4]
          路，进而阻断HF的发生发展 。目前，抗HF药物的研发
                                                              克隆抗体（批号分别为 bs-10196R、bs-0578R、bs-0686R、
          速度较为缓慢，尚无确切疗效的药物可应用于临床。
                                                              bs-0128R、bs-6951R）均购自北京博奥森生物技术有限公
              蒙药蓝盆花，又称蒙古山萝卜花，主产于内蒙古、黑
                                                              司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phos‐
                       [5]
          龙江、吉林等地 。其味甘、涩，性凉，具有清肝热、肺热
                                                              phate dehydrogenase，GAPDH）多克隆抗体（批号 10494-
          及解毒、“燥合日乌”（即干燥积水、消肿、祛风湿）的作
                                                              1-AP）、兔源 β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批号
            [6]
          用 。前期本课题组通过超高效液相色谱-飞行时间质
                                                              20536-1-AP）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；Dy‐
          谱法鉴定发现，蓝盆花中含有氨基酸类、酚类、皂苷类、
                                                              Light 800 标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 ATWF15081）
          黄酮类、生物碱类等多种有效成分，其中黄酮类成分为
                                                              购自亚科因（武汉）生物技术有限公司。
                        [7]
          其主要药效成分 。相关研究显示，在德都红花-7、额力
                                                              1.3 动物
          根-7 等蒙医经典药方中，黄酮类成分均具有明显抗 HF
                                                                  本研究所用动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠，共
          的作用   [4，8] 。此外，本课题组前期通过转录组测序和京都
                                                              78只，体重（200±20） g，购自北京维通利华实验动物技
          基因与基因组百科全书富集差异基因发现，蓝盆花可使
                                                              术有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（京）2021-
          PI3K/Akt 信号通路相关蛋白及 miRNA-21 表达显著下
                                                              0006。大鼠于内蒙古医科大学实验动物中心先适应性
            [7]
          调 。本研究拟在前期研究基础上，采用四氯化碳
                                                              饲养 1 周后进行实验，饲养环境温度为 20～22 ℃、相对
         （CCl4 ）诱导 HF 大鼠模型，初步揭示蓝盆花醇提物改善
          HF的作用，并围绕miRNA-21/PTEN/PI3K/Akt轴探讨其                 湿度为 45%～65%、昼夜明暗交替。本研究动物实验经
                                                              内蒙古医科大学医学伦理学会批准后实施（伦理审批号
          可能的作用机制，为明确蒙药蓝盆花的适应证及其开发
          应用提供参考。                                             为YKD2019144）。
          1 材料                                                1.4 细胞株
          1.1 主要仪器                                                大鼠肝星状细胞株HSC-T6购于北京北纳科技有限
              本研究所用的主要仪器有 1000B-8W 型药物粉碎                      公司。
          机、SM2010R 型切片机（德国 Leica 公司），CLx800 型酶               2 方法
          标仪（美国 Bio-Tek 公司），CT15RE 型高速离心机（日本                  2.1 蓝盆花醇提物的制备
          Hitachi 公司），DYY-6C 型电泳仪（北京六一生物科技有                       蓝盆花药材经粉碎后，按药液比 1∶10（g/mL）加入
          限公司），7500 Fast 型荧光定量聚合酶链式反应（PCR）                    70%乙醇回流提取，重复2次；过滤，取滤液合并，旋转蒸
          仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）。                    发仪干燥浓缩，即得蓝盆花醇提物粉末，详细提取过程
          1.2 主要药品与试剂                                         参考文献[9]。采用紫外-可见分光光度法测得该醇提物
              蓝盆花药材（批号 191219）购自内蒙古天盛蒙中医                      中总黄酮含量为38%。


          · 278 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3                               中国药房  2024年第35卷第3期
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