Page 51 - 《中国药房》2024年2期

止得咳颗粒是在广西中医药大学附属瑞康医院临 1.3 动物
床经验方的基础上研制而成的中药复方制剂，由龙脷 本研究所用动物为雄性清洁级健康 SD 大鼠，共 24
叶、射干、桔梗、白前、黄芩、柴胡、青天葵等10味药材配 只，体重（220±20）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有
伍而成，现已获得药物临床试验批准。相关药理学研究 限公司，动物生产许可证号SCXK（湘）2019-0001。本文
表明，止得咳颗粒具有止咳、化痰和利咽等功效，常用于 涉及的动物实验方案经广西中医药大学伦理委员会批
[1]
急、慢性支气管炎、肺炎的治疗 。但目前止得咳颗粒的 准，批准号DW20220726-159。
研究仅限于质量控制、提取工艺和药效学研究 [2―4] ，尚未 2 方法
有其体内代谢产物的相关研究。通过研究中药复方制 2.1 止得咳颗粒药液的制备
剂代谢产物，鉴定其被吸收的活性成分，确定该复方制 取止得咳颗粒 500 g，研细，加入超纯水 5 000 mL，
剂的药效活性成分，是阐明其药效物质基础和作用机制 搅拌至完全溶解，即得止得咳颗粒药液，于 4 ℃保存
的重要环节。但中药复方成分的复杂性和体内代谢的 备用。
多样性，导致其代谢产物的鉴定具有一定难度。超高效 2.2 动物分组及给药
液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q- 将 24 只雄性 SD 大鼠随机分为空白组（n＝6）、给药
Exactive-MS）技术具有高灵敏度、高选择性和高分辨率 组（n＝18）。实验前，所有大鼠均于 SPF 级屏障环境中
的特点，能在复杂体系中快速识别与定量分析化学成 适应性喂养4 d，自由摄食、饮水；给药前禁食12 h（自由
分，现已成为中药代谢产物鉴定的重要手段。基于此， 饮水），给药组大鼠按 9.45 g/kg（临床等效剂量）灌胃止
本研究采用UPLC-Q-Exactive-MS技术分析止得咳颗粒 得咳颗粒药液，空白组大鼠灌胃等体积超纯水，每天 2
的化学成分，并对大鼠给予止得咳颗粒后的血清、尿液 次，每次灌胃间隔6～8 h，连续3 d。
和粪便进行检测，分析其原型成分及可能的代谢产物， 2.3 生物样品的收集与处理
以期为阐明该制剂的药效物质基础和指导临床安全用 末次给药后 1 h，取给药组大鼠 6 只，用戊巴比妥钠
药提供依据。 麻醉后行腹主动脉采血，于4 ℃下以3 000 r/min离心20
1 材料 min，取上清液，得血清样品。将给药组剩余的12只大鼠
1.1 主要仪器 均分后置于2个代谢笼中，其中一个代谢笼用于收集12
Ultimate 3000型超高效液相色谱仪和Q-Exactive高 h 内尿液，另一个用于收集 12 h 内粪便。将收集的尿液
分辨质谱仪均购自美国 Thermo Fisher Scientific 公司； 以 3 500 r/min 离心 10 min，取上清液，以氮气浓缩至 2
XW-80A 型涡旋仪购自上海沪西分析仪器厂有限公司； mL，得尿液样品；将收集的粪便于50 ℃烘干，碾碎，得粪
Milli-Q Gradient A10 型超纯水纯化系统购自美国 Milli‐ 便样品。空白组大鼠同法收集血清、尿液及粪便样品。
pore 公司；5415R 型低温高速离心机购自艾本德中国有 以上样品均置于－80 ℃冰箱中保存。
限公司；NDK200-2N 型氮吹仪购自杭州米欧仪器有限 2.4 生物供试品溶液的制备
公司。 2.4.1 血清供试品溶液的制备
1.2 药品与试剂 解冻血清样品，吸取100 μL，加入乙腈300 μL，涡旋
止得咳颗粒由广西中医药大学附属瑞康医院自制 30 s，于－20 ℃下超声（功率 250 W，频率 40 kHz，下同）
（批号20210608）；野鸢尾黄素、黄芩素、橙皮苷、黄芩苷、 提取20 min，于4 ℃下以13 000 r/min离心5 min；取上清
柠檬酸、右旋奎尼酸、柴胡皂苷 C、D-（+）-蔗糖、尿苷、 液300 μL以氮气吹干，用超纯水100 μL复溶，涡旋振荡
L-酪氨酸、芦荟大黄素、圣草酚-7-O-葡萄糖苷、山柰 1 min，于 4 ℃下以 13 000 r/min 离心 5 min，取全部上清
酚-3-O-芸香糖苷、汉黄芩苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸 液，即得。
苷、绿原酸、咖啡酸、异鼠李素、山柰酚、木犀草素、柚皮 2.4.2 尿液供试品溶液的制备
素、香叶木素、黄芩新素、乔松素、次野鸢尾黄素、汉黄芩 解冻尿液样品，涡旋 1 min，取 500 μL 置于 1.5 mL
素（纯度均大于98%，批号分别为RP211021、RP220627、 离心管中，于4 ℃下以13 000 r/min离心5 min；取全部上
RP220321、RP220827、RP220527、RP200120、RP200604、 清液，过0.22 μm水相滤膜，取滤液80 μL，即得。
RP210204、RP210525、RP200602、RP220614、RP220426、 2.4.3 粪便供试品溶液的制备
RP210827、RP221114、RP221223、RP210916、RP220610、 称取粪便样品10 mg，加入1%甲酸乙腈溶液1 mL，
RP211118、RP200312、RP210105、RP220113、RP210718、 涡旋 30 s，于－20 ℃下超声提取 20 min，于 4 ℃下以
RP221129、RP211213、RP221130）对照品均购自成都麦 13 000 r/min 离心 5 min；取上清液 800 μL 以氮气吹干，
德生科技有限公司；甲醇、乙腈为质谱纯，甲酸、甲酸铵 用 80% 乙腈溶液（含 1% 甲酸）100 μL 复溶，于 4 ℃下以
为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。 13 000 r/min离心5 min，取全部上清液，即得。

中国药房 2024年第35卷第2期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 2 · 173 ·