Page 46 - 《中国药房》2024年2期
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气试验，记录超基准值（delta over baseline，DOB）；然后              2.6 大鼠胃黏膜组织中 iNOS、HMGB1、NF-κB 蛋白表
          每只大鼠灌胃1×10 cfu/mL的HP菌悬液1.5 mL，每周2                   达的检测
                           9
          次，共5次；末次灌胃后大鼠正常喂养2周，再禁食、禁水                              取大鼠胃黏膜组织，提取总蛋白，定量后电泳，转膜，
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          12 h，行 C尿素呼气试验，以DOB值＞4表示HP相关性                       室温封闭 2 h，再分别加入 iNOS（稀释比例为 1∶2 000）、
                      [7]
          胃炎造模成功 。将造模成功的大鼠随机分成模型组、                            HMGB1（稀释比例为 1∶1 000）、p-NF-κB p65（稀释比例
          阳性对照组和 GL 低、中、高剂量组，每组 12 只；另随机                      为 1∶2 000）、NF-κB p65（稀释比例为 1∶1 000）、GAPDH
          选取12只正常大鼠作为正常对照组。GL低、中、高剂量                         （稀释比例为 1∶1 000）抗体，4 ℃孵育过夜；再加入二抗
                                         [8]
          组大鼠分别灌胃 5、20、50 mg/kg GL ，阳性对照组大鼠                  （稀释比例为1∶2 000），室温孵育90 min，曝光，显影。使
          按 HP 标准四联方案分别以 3.6、36、180、72 mg/kg 灌胃               用Image-Pro Plus 6.0软件进行分析，以GAPDH为内参，
                                               [9]
          奥美拉唑、胶体果胶铋、阿莫西林、克拉霉素 ，正常对照                          以目标蛋白与内参的灰度值比值评价目标蛋白的相对
          组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天 1 次，连续                          表达量，再以 p-NF-κB p65/NF-κB p65 计算 NF-κB p65
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          30 d，给药结束后行 C尿素呼气试验。                                磷酸化水平。
          2.2 大鼠胃黏膜组织病理变化观察与评分                                2.7 统计学方法
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              末次 C 尿素呼气试验结束后处死大鼠，分离大鼠                             采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。计量资
          胃黏膜组织，经固定、脱水、包埋、切片、脱蜡和水化后进                          料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
          行HE染色，使用显微镜观察大鼠胃黏膜组织病理变化，                           两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
                                                    [10]
          并根据胃黏膜慢性炎症的评分标准进行病理评分 。                             3 结果
          2.3 大鼠胃黏膜组织细胞形态学观察                                  3.1 GL对各组大鼠DOB值的影响

              取“2.2”项下大鼠胃黏膜组织，经固定、漂洗、锇酸固                          建模前，各组大鼠DOB值比较，差异均无统计学意
          定、梯度脱水、树脂包埋、切片、铀铅双染色后，使用透射                          义（P＞0.05）。建模后，与正常对照组比较，其他各组大
          电子显微镜观察大鼠胃黏膜组织细胞形态并拍照。                              鼠 DOB 值均显著升高（P＜0.05）。药物干预后，与正常
          2.4 大鼠胃黏膜组织中炎症与氧化应激相关因子水平                           对照组比较，模型组大鼠DOB值显著升高（P＜0.05）；与
          的检测                                                 模型组比较，GL 低、中、高剂量组和阳性对照组大鼠
              将大鼠胃黏膜组织制成匀浆后，严格依据ELISA试                        DOB值均显著降低（P＜0.05）；与GL低剂量组比较，GL
          剂盒说明书检测大鼠胃黏膜组织中 IL-8、IL-1β、TNF-α                    中、高剂量组大鼠 DOB 值均显著降低（P＜0.05）；与 GL
          水平，依据ROS、MDA检测试剂盒说明书检测大鼠胃黏                          中剂量组比较，GL高剂量组大鼠DOB值显著降低（P＜
          膜组织中ROS、MDA水平。                                      0.05）。结果见表1。
          2.5 大鼠胃黏膜组织中 HMGB1、NF-κB mRNA 表达                         表1 各组大鼠DOB值比较（x±s，n＝12）
          的检测                                                 组别             建模前          建模后         干预后
                                                              正常对照组         0.32±0.06    2.36±0.13   2.48±0.16
              取大鼠胃黏膜组织，用Trizol试剂提取总RNA。以
                                                              模型组           0.28±0.04    46.53±7.21 a  45.97±7.23 a
          RNA 为模板合成 cDNA 后，测定反转录的 cDNA 浓度，                    GL低剂量组        0.35±0.07    45.62±6.98 a  37.84±5.62 b
          适当分装，于－20 ℃保存。扩增条件：95 ℃预变性 60                       GL中剂量组        0.33±0.05    47.12±7.52 a  28.45±4.57 bc
                                                              GL高剂量组        0.26±0.03    44.98±7.26 a  16.35±2.18 bcd
          s；95 ℃变性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸45 s，共循环              阳性对照组         0.30±0.02    46.28±7.35 a  14.68±1.57 b
          40 次。HMGB1 的上游引物为 5′-AGATATGGCAAAG-                    a：与正常对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与
          GCTGACAAGGC-3′，下游引物为5′-GGGCGGTACTC-                 GL低剂量组比较，P＜0.05；d：与GL中剂量组比较，P＜0.05。
          AGAACAGAACAAG-3′，产物片段为 148 bp；NF-κB 的               3.2 GL对大鼠胃黏膜组织病理变化的影响

          上游引物为 5′-TGTGGTGGAGGACTTGCTGAGG-3′，                     与正常对照组比较，模型组大鼠胃黏膜变薄，皱襞
          下游引物为 5′-AGTGCTGCCTTGCTGTTCTTGAG-3′，                变浅，腺体数量明显减少，有水肿、出血、糜烂、炎症细胞
          产物片段为126 bp；GAPDH的上游引物为5′-CTTTGG-                   浸润。与模型组比较，GL 低、中剂量组大鼠胃黏膜增
          TATCGTGGAAGGACTC-3′，下游引物为 5′-GTAGAG-                厚，皱襞正常，腺体数量明显恢复，水肿、出血、糜烂减
          GCAGGGATGATGTTCT-3′，产 物 片 段 为 110  bp。 以            轻，有少量炎症细胞浸润；GL高剂量组和阳性对照组大
          GAPDH 为内参，按 2      －ΔΔCt  法计算大鼠胃黏膜组织中               鼠胃黏膜厚度与腺体数量基本恢复正常，无明显炎症细
          HMGB1、NF-κB mRNA的相对表达量。                             胞浸润。结果见图1。


          · 168 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2                               中国药房  2024年第35卷第2期
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