Page 25 - 《中国药房》2024年2期

换蔗糖溶液和水的位置以防止位置偏爱。训练结束后 水平（结果以C组为参照进行归一化处理）。
禁水 24 h，再于笼中放入 1% 蔗糖溶液和水各 1 瓶，中途 2.6 统计学方法
交换蔗糖溶液和水的位置1次。记录24 h内蔗糖溶液和 采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。所有数
水的消耗量，并按下式计算各组小鼠的糖水偏爱率：糖 据以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
水偏爱率＝蔗糖溶液消耗量/（蔗糖溶液消耗量+水消耗 两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Dunnett’s T3检验
量）×100% 。 （方差不齐）。检验水准α＝0.05。
[8]
2.2.2 运动总距离 3 结果
末次给药1 h后进行旷场实验。将小鼠于旷场箱固 3.1 ICSⅡ对小鼠行为学的影响
定角落以头朝上沿箱壁放入，观察其 5 min 内的活动情 3.1.1 糖水偏爱率
况并记录运动总距离。每只小鼠测试结束后清理旷场 与 C 组比较，NS 组小鼠的糖水偏爱率显著降低
箱并以乙醇擦拭，待挥干后，再进行下次测试。 （P＜0.05）；与 NS 组比较，各药物组小鼠的糖水偏爱率
2.2.3 静止不动时间 均显著升高（P＜0.05）。结果见图1A。
（1）悬尾实验：末次给药4 h后进行悬尾实验。将医 100 b b b b 5 b
用胶带粘于小鼠尾根 2～3 cm 处，将小鼠固定并倒挂在 80 a 4 a b
悬尾实验架上，观察其 5 min 内的活动情况并记录静止 糖水偏爱率/% 60 运动总距离/m 3 2
40
不动时间（以小鼠放弃挣扎视为静止不动）。每只小鼠 20 1
测试结束后清理地面粪便并以乙醇擦拭，待挥干后，再 0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
进行下次测试。 A.糖水偏好实验 B.旷场实验
（2）强迫游泳实验：末次给药 10 h 后进行强迫游泳 150 a 150 a
实验。将小鼠以头朝上沿强迫游泳实验桶桶壁放入水 100 100
（水温约25 ℃）中，观察其5 min内在水中的活动情况并 静止不动时间/s b b 静止不动时间/s b b
记录静止不动时间（以小鼠放弃挣扎视为静止不动）。 50 b b 50 b b
每3只小鼠实验后换水1次。 0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
2.3 小鼠海马组织病理形态学观察 C.悬尾实验 D.强迫游泳实验
行为学实验结束后，将小鼠麻醉并脱颈椎处死，采 Ⅰ：C组；Ⅱ：NS组；Ⅲ：ECS组；Ⅳ：ICSⅡ-L组；Ⅴ：ICSⅡ-M组；Ⅵ：
用尼氏染色法观察小鼠海马神经元形态及尼氏体情况。 ICSⅡ-H组；a：与C组比较，P＜0.05；b：与NS组比较，P＜0.05。
随机选取每组4只小鼠的全脑组织，置于多聚甲醛溶液 图1 ICSⅡ对小鼠行为学的影响（x±s，n＝10）
中固定；取出，经脱水、石蜡包埋、切片、捞片、烤片、脱 3.1.2 运动总距离
蜡、冲洗后，滴加甲苯胺蓝染色液于 60 ℃下染色 15 与 C 组比较，NS 组小鼠的运动总距离显著缩短
min；冲洗、脱水、透明后封片，使用光学显微镜观察各组 （P＜0.05）；与NS组比较，ECS组和ICSⅡ-H组小鼠的运
小鼠海马CA3区神经元及尼氏体的形态，并对结构完整 动总距离均显著延长（P＜0.05）。结果见图1B。
的神经元进行数量统计。 3.1.3 静止不动时间
2.4 小鼠海马组织中GABA、Glu含量测定 与 C 组比较，NS 组小鼠悬尾实验和强迫游泳实验
取各组剩余 6 只小鼠的部分海马组织，加入生理盐 的静止不动时间均显著延长（P＜0.05）；与 NS 组比较，
水适量，冰上匀浆、离心后取上清液，采用ELISA法以酶 各药物组小鼠上述实验的静止不动时间均显著缩短
标仪检测其 GABA、Glu 含量，并计算 GABA/Glu 的比 （P＜0.05）。结果见图1C、1D。
值。上述检测严格按照相应试剂盒说明书操作。 3.2 ICSⅡ对小鼠海马组织病理形态的影响
2.5 小鼠海马组织中GABA能神经系统相关蛋白表达 与 C 组比较，NS 组小鼠海马 CA3 区的神经元形态
水平检测 不规则，细胞核深染、固缩明显，尼氏体（呈蓝色，下同）
采用Western blot法进行检测。取“2.4”项下各组小 减少，结构完整的神经元数量显著减少（P＜0.05）；与NS
鼠的剩余海马组织，于冰上匀浆并提取蛋白，以BCA法 组比较，各药物组小鼠海马 CA3 区的神经元均排列整
定量后进行变性处理。取变性蛋白适量，经十二烷基硫 齐、结构完整清晰，尼氏体增多，结构完整的神经元数量
酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转膜、封闭；洗膜后， 均显著增加（P＜0.05）。结果见图2、图3A。
加 入 β -actin、GABA（A）Rα1、GABA（B）R1、GAD67、 3.3 ICSⅡ对小鼠海马组织中GABA、Glu含量的影响
GAT-3、VGAT一抗（稀释比例均为1∶1 000），孵育过夜； 与 C 组比较，NS 组小鼠海马组织中 GABA 含量和
再次洗膜后，加入相应二抗（稀释比例均为1∶2 000），孵 GABA/Glu 比值均显著降低（P＜0.05），Glu 含量显著升
育 2 h；洗膜后，加入 ECL 显影剂显影，并置于凝胶成像 高（P＜0.05）；与 NS 组比较，各药物组小鼠海马组织中
系统下成像。使用Quantity One软件计算目的蛋白与内 GABA 含量和 GABA/Glu 比值均显著升高（P＜0.05），
参蛋白（β-actin）的灰度值比值，以表示目的蛋白的表达 Glu含量均显著降低（P＜0.05）。结果见图3B～3D。

中国药房 2024年第35卷第2期 China Pharmacy 2024 Vol. 35 No. 2 · 147 ·