Page 134 - 《中国药房》2024年2期
P. 134

达稳态；其蛋白结合率低（＜10%），可迅速透过血脑屏                          2.3.2 色谱分析法
          障。LEV 较少通过细胞色素 P450（cytochrome P450，                    色谱分析法具有适用性强、应用范围广、定量准确、
          CYP）酶系统进行肝脏代谢（约为 2.5%），主要通过肾脏                       选择性高、灵敏度高、能自主开发新方法、价格相对低等
          排泄（95%），所以与其他药物（包括其他AED）的相互作                        优点，但也存在一些不足，如仪器设备价格较高、检测时
          用较少，但肾功能异常患者以及联合使用其他主要经肾                            间较长、样品前处理复杂、可能会用到毒性有机试剂等。
                                                [4]
          脏排泄的药物可能会减慢其在体内的消除 。研究显                             气相色谱（gas chromatography，GC）和液相色谱（liquid
          示，相同剂量的 LEV 在儿童体内的清除率比成人高                           chromatography，LC）是最常用的色谱方法。近年来，
          30%～40%，在妊娠期妇女体内的药物浓度较健康成人                          LC- 串 联 质 谱 法（liquid  chromatography-tandem  mass
          低 60%；轻度至重度肾功能损害[肌酐清除率（creatinine                   spectrometry，LC-MS/MS）在 LEV 的检测中也被广泛使
          clearance rate，Ccr）＜30～80 mL/min（1.8～4.8 L/h）]患     用，其特异性高，运行时间短，且可以同时测定多种
          者的 LEV 清除率也有所降低，这将导致药物暴露增加；                         物质。
          LEV 在老年癫痫患者（年龄＞65 岁）中的清除率低于年                            高效液相色谱（HPLC）方法是目前LEV检测中应用
          轻患者；在轻度至中度肝功能损害患者中，LEV 或其主                          最广泛的一种分析方法，该法具有选择性、精密度和准
                                        [3]
          要代谢物的药动学参数无显著变化 。                                   确度均较高的优点，但需要对生物样品进行前处理 。
                                                                                                           [9]
          2 LEV的血药浓度测定方法                                      Contin等 建立了HPLC方法用于检测人血浆中LEV的
                                                                     [10]
          2.1 样本选择                                            含量，分析时间仅需 13 min。Engelbrecht 等 开发了一
                                                                                                   [11]
              AED 进行 TDM 最常用的样本是血清和血浆，LEV                     种简单、快速、经济的患者血浆/血清中 LEV 含量的
          也不例外。然而，以血浆或血清为样本时需要采集足够
                                                              HPLC测定方法，血浆/血清样品前处理仅需要用甲醇沉
          量的血液，当TDM对象为儿童患者时就存在采血困难，                                                    [12]
                                                              淀除去蛋白即可。Ibrahim 等 建立了同时测定人血浆
          为此，有文献报道了以干血点法（dried blood spot，DBS）
                                                              中4种AED（LEV、拉莫三嗪、奥卡西平、卡马西平）含量
          为样本的TDM方法，该法具有简单、方便、创伤小、需要
                                                              的 HPLC 方法，该方法灵敏度高、选择性好、价格低廉。
          的血量比传统采血方法更少的优点。然而，采用DBS方
                                                              自1994年来，已有多篇文献报道了HPLC方法用于测定
          法进行TDM时，检测结果易受血液红细胞压积（hemato‐
                                                              人血浆/血清中的 LEV 浓度，检测器多为紫外检测器或
          crit，HCT）的影响，HCT 越高，浓度偏差越大（越偏高），
                                                              二极管阵列检测器。随着检测技术的进步，复杂耗时的
                                                        [5]
          对于血浆蛋白结合率高的药物，这种偏差更加显著 。
                                                              固相萃取或液-液萃取样品前处理方法已被简单的沉淀
          由于唾液与血清LEV浓度之间呈显著的正相关性，因此
                                                              蛋白方法取代。与此同时，分析时间越来越短，并且同
          唾液检测可以作为血液检测的替代方法用于LEV检测。
                                                              时检测多种AED分析方法的报道也越来越常见。
          虽然唾液中的AED监测可能具有一定的临床适用性，但
                                                                  与 HPLC 相比，高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/
          由于每种药物都需要建立一个数据库，样本受环境干扰
                                                              MS）方法具有以下优点：（1）灵敏度更高，检测范围更
                                             [6]
          大等因素影响，目前尚未进行大规模应用 。
          2.2 采样时间                                            广，且能提供相对分子质量和结构信息；（2）特异性高，
                                                                                                     [13]
                                                              不受代谢产物及其他药物影响。例如，Guo 等 建立了
              由于LEV的t1/2相对较短，采样时间对药物浓度的解
                                                              人血浆、血清、唾液中LEV浓度测定的HPLC-MS/MS方
          释就很重要。通常在患者服药2～3 d后，于次日清晨服
                                                                                                       [14]
                                                              法，该方法快速、简便、准确、稳定。Yeap 等 采用
          药前采集3～4 mL血液作为TDM样本。由于LEV可在
                                                              HPLC-MS/MS 方法检测人血浆中的 LEV 及其代谢物，
          体外水解，因此须尽快处理全血样本以避免因LEV水解
          导致的测定浓度降低 。                                         检测限可低至0.25 mg/mL，分析时间仅需2 min。
                            [7]
          2.3 检测方法                                                超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）方法可
          2.3.1 免疫分析法                                         以在更短时间内同时测定多种化学结构。与 HPLC 方
              免疫分析法即利用待测物抗原与抗体的特异反应，                          法相比，UPLC-MS/MS 方法具有分析速度更快、柱效更
          通过酶与底物产生可供检测的化学反应或荧光标记等                             高、进样体积更小的优势；与 HPLC-MS/MS 方法相比，
          方法来进行定量测定，是最常用的 TDM 方法，具有快                          UPLC-MS/MS 方法的离子化效率更高，基质效应减小。
                                                                           [15]
          速、准确、方便、样本前处理简单、自动化程度高及通量                           例如，Juenke 等 建立了同时测定 LEV 与加巴喷丁的
          高等优点。然而，免疫分析法也有一定的局限性，例如                            UPLC-MS/MS 方法，该方法运行 1.5 min 即可达到基线
          类似结构的干扰物会影响检测结果，影响免疫分析法的                            分离，LEV的线性范围为1～150 mg/L。除此之外，该方
          特异性；该法需要针对每一种药物研制相应的商品化试                            法的样本前处理采用沉淀蛋白方法，较为简单方便。
                                                                     [16]
          剂盒，否则无法对药物进行检测；此外，该法价格昂贵，                           Blonk 等 建立了检测新生儿体内 LEV 浓度的 UPLC-
          患者负担较重。目前已有商品化LEV检测试剂盒上市，                           MS/MS 方法，与已发表的检测 LEV 的 LC-MS/MS 方法
                                                     [8]
          其通量高、自动化程度高的优点使其应用日渐广泛 。                            相比，该方法需要的血浆样本量更少，适用于新生儿、儿

          · 252 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2                               中国药房  2024年第35卷第2期
   129   130   131   132   133   134   135   136   137   138   139