Page 76 - 《中国药房》2023年24期
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2.2.4 精密度试验                                         超声处理 30 min 的提取效率为最优。本课题组前期对
              取“2.2.3”项下混合对照品溶液（绿原酸、木犀草                       不同流动相体系进行比较发现，相比于乙腈，以甲醇作
          素、槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸 A、木犀草苷质                          为有机相时各成分的分离度更好；同时，在水相中加入
          量浓度分别为 2 515.00、210.00、25.25、100.25、125.50、         0.1% 甲酸能有效提高各成分的质谱响应并改善色谱峰
          3 750.00、980.00 ng/mL），按“2.2.2”项下色谱与质谱条件            峰形，故最终将流动相体系确定甲醇-0.1%甲酸溶液（梯
          连续进样 6 次，记录峰面积。结果显示，各成分峰面积                          度洗脱）。传统药材成分组成复杂多样，且各成分在不
          RSD均小于3.00%（n＝6），表明仪器精密度良好。                         同电离模式下离子化程度和响应强度均有所差异，为全
          2.2.5 稳定性试验                                         面、精准表征山苦荬药材所含化学成分，本研究采用正、
              精密称定山苦荬药材粉末（批号C20210514）约1.0 g，                 负两种电离模式对山苦荬药材中的化学成分进行辨识
          精密称定，按“2.2.1（2）”项下方法制备供试品溶液，分别                      分析。
          于室温下放置0、3、6、9、12、24 h时按“2.2.2”项下色谱与                 3.2 含量测定的质谱条件优化
          质谱条件进样分析，记录峰面积。结果显示，各成分峰                                传统药材饮片中所含成分含量的高低与其药效的
          面积RSD均小于3.00%（n＝6），表明供试品溶液在室温                       强弱、质量的优劣密切相关。为保障山苦荬药效和质量
          放置24 h内稳定性良好。
                                                              的稳定性，本研究通过 HPLC-MS/MS 技术对其中的绿
          2.2.6 重复性试验
                                                              原酸、木犀草素、槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸 A、
              精密称定山苦荬药材粉末（批号C20210514）约1.0 g，
                                                              木犀草苷7种成分进行了含量测定。本课题组前期采用
          平行 6 份，按“2.2.1（2）”项下方法制备供试品溶液，再按
                                                              质谱全扫描方式对各待测成分的离子化模式进行了确
         “2.2.2”项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积并代                         认，结果显示，7种成分在负离子模式下的响应均优于正
          入回归方程计算样品含量。结果显示，绿原酸、木犀草
                                                              离子模式；在确认各待测成分的离子化模式后，本课题
          素、槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸A、木犀草苷平均                          组通过设置不同碰撞能量分别进行产物离子扫描，初步
          含量分别为 2 582.90、97.73、0.95、16.52、9.35、1 031.87、
                                                              获得碰撞能量、前体离子及产物离子后，采用质谱自动
          1 919.05 μg/g，且RSD均小于3.00%（n＝6），表明方法重
                                                              优化程序对碰撞能量、前体离子及产物离子进一步优
          复性良好。
                                                              化，最终获得各待测成分的质谱分析参数。
          2.2.7 加样回收率试验
                                                              3.3 含量测定的结果分析
              精 密 称 定 已 知 含 量 的 山 苦 荬 药 材 粉 末（批 号
                                                                  3 批不同来源山苦荬药材含量测定结果表明，批号
          C20210514）6 份，每份约 0.5 g，精密称定，分别加入
                                                              C20210514 和批号 T20210607 的山苦荬药材中槲皮素、
         “2.2.1（1）”项下混合对照品溶液适量（加入量与已知量
                                                              芦丁及原儿茶酸含量均明显低于批号H20210523样品，
          相等），按“2.2.1（2）”项下方法制备供试品溶液，再按
                                                              而其他各成分含量均明显高于批号H20210523样品；与
         “2.2.2”项下色谱与质谱条件进样分析，记录峰面积并计
          算加样回收率。结果显示，绿原酸、木犀草素、槲皮素、                           批号 T20210607 样品相比，批号 C20210514 的山苦荬药
          芦丁、原儿茶酸、异绿原酸A、木犀草苷的平均回收率分                           材中芦丁含量较高，而绿原酸含量较低，其他成分含量
          别 为 101.48%、99.83%、99.35%、96.72%、105.84%、           则相当。由此可见，地域差异对山苦荬药材中上述成分
          98.29%、99.58%（RSD 分 别 为 2.24%、2.94%、3.22%、          的含量存在一定影响，但由于本研究涉及样本来源较为
          3.16%、3.07%、2.60%、2.44%，n＝6）。                       局限，后期将扩大药材收集范围，作进一步评价。
          2.2.8 样品含量测定                                            综上所述，本研究所建成分鉴别和含量测定方法快
              取 3 批 山 苦 荬 药 材（H20210523、T20210607、            速、简便，可为山苦荬质量标准建立提供科学依据，也可
          C20210514）各 3 份，按“2.2.1（2）”项下方法制备供试品                为今后山苦荬血浆移行成分解析、移行-网络分析奠定
          溶液，再按“2.2.2”项下色谱与质谱条件进样测定，记录                        数据基础。
          峰面积并代入回归方程计算样品含量，结果见表4。                             参考文献
          表4 不同来源山苦荬中7种成分平均含量（n＝3，μg/g）                       [ 1 ]  孙丽君，常福厚，白图雅，等. 山苦荬保肝活性部位筛选及
           批号      绿原酸  木犀草素  槲皮素   芦丁   原儿茶酸 异绿原酸A  木犀草苷          其化学成分研究[J]. 中国药房，2021，32（9）：1089-1092.
           H20210523  1 145.77  23.75  2.12  23.18  21.85  833.25  199.56  SUN L J，CHANG F H，BAI T Y，et al. Screening of hepato-
           T20210607  3 261.25  97.86  0.92  1.06  9.74  1 024.80  1 800.74  protective  activity  fractions  from  Ixeris  chinensis  and
           C20210514  2 632.21  97.90  0.95  16.43  9.35  1 045.58  1 869.78
                                                                   study  on  its  chemical  compositions[J].  China  Pharm，
          3 讨论                                                     2021，32（9）：1089-1092.
          3.1 样品前处理条件及成分鉴别的色谱和质谱条件                            [ 2 ]  海宇 . 绿原酸与槲皮素协同抗炎效应及用量优化研究
          优化                                                       [D]. 西安：西北大学，2021.
              本课题组前期对样品处理方式（超声处理、加热回                               HAI  Y.  Research  on  the  synergistic  anti-inflammatory
          流处理）、处理时间（15、30、45 min）进行考察，结果显示，                        effect  and  dosage  optimization  of  chlorogenic  acid  and


          · 3010 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 24                            中国药房  2023年第34卷第24期
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