Page 75 - 《中国药房》2023年24期

135.044 01，即准分子离子峰经高能撞击后，首先失去 1 95%A；7.0～7.01 min，95%A→10%A；7.01～9.5 min，
分子咖啡酸基团产生 m/z 353.088 23[M－H－C9H6O3] ， 10%A）；流速为 0.25 mL/min，柱温为 35 ℃，进样量为
－
进 一 步 丢 失 1 分 子 咖 啡 酸 基 团 产 生 m/z 191.055 48 3 μL。
[M－H－C9H6O3－C9H6O3] ，或丢失1分子奎宁酸基团产 （2）质谱条件：采用 ESI，以多反应监测（multiple
－
－
生 m/z 179.034 16[M－H－C9H6O3－C7H10O5] 碎片离子
reaction monitoring，MRM）模式进行负离子扫描；脱溶
峰，后者进一步脱去1分子CO2产生m/z 135.044 01[M－ 剂温度为 526 ℃；雾化气流量为 3 L/min；加热气流量为
－
H－C9H6O3－C7H10O5－CO2] 。通过分子式、化合物裂解
10 L/min。7个待测成分的质谱参数见表2，混合对照品
[14]
规律、相关文献 及与对照品比对，确认 30 号化合物为
溶液、供试品溶液图谱见图4（空白对照溶液图谱略）。
异绿原酸 A。化合物 30 可能的裂解途径及二级质谱图
表2 7种成分的保留时间及质谱分析参数
见图3。
峰号 成分 保留时间/min 定量离子对m/z 碰撞能量/eV
1 原儿茶酸 3.539 152.9→108.9 18
2 绿原酸 3.807 353.3→190.9 16
3 异绿原酸A 4.500 515.3→353.0 15
4 木犀草苷 4.724 447.0→285.0 28
5 芦丁 4.798 609.0→301.0 33
100 6 槲皮素 5.638 301.0→150.9 22
90 7 木犀草素 5.857 284.8→133.0 32
80
×10 5 ×10 5
70 35 3 25 3
相对丰度/% 50 30 4 7 20 1 4
60
25
40
30 20 1 intensity 15 2 7
191.055 48 intensity 6
20 179.034 16 353.088 23 15 2 5 6 10 5
10 135.044 01 515.119 51 10
5
0 5
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 0 0
m/z
0 2.5 5.0 7.5 0 2.5 5.0 7.5
图3 化合物30可能的裂解途径及MS 图 时间/min 时间/min
2
A.混合对照品溶液 B.供试品溶液
2.2 山苦荬中7种成分的含量测定 1：原儿茶酸；2：绿原酸；3：异绿原酸A；4：木犀草苷；5：芦丁；6：槲
2.2.1 溶液的制备 皮素；7：木犀草素。
（1）混合对照品溶液的制备：精密称定绿原酸对照 图4 7种成分的MRM色谱图
品 12.58 mg、异绿原酸 A 对照品 5.25 mg、木犀草苷对照 2.2.3 线性关系考察
品 9.80 mg 对照品置于同一 10 mL 容量瓶中，精密量取 精密量取“2.1.1（1）”项下绿原酸、木犀草素、槲皮
“2.1.1”项下单一对照品贮备液木犀草素1 000 μL、槲皮 素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸 A、木犀草苷单一对照品
素 10 μL、芦丁 200 μL、原儿茶酸 100 μL 置于上述同一
贮备液适量于同一10 mL容量瓶中，甲醇稀释、定容，得
10 mL容量瓶中，甲醇溶解、定容，得绿原酸、木犀草素、
质量浓度为 50.300、4.200、0.505、2.005、2.510、75.000、
槲皮素、芦丁、原儿茶酸、异绿原酸 A、木犀草苷质量浓
19.600 μg/mL的混合对照品溶液，分别精密吸取上述混
度 分 别 为 1 258.00、42.00、0.51、8.02、5.02、525.00、
合对照品溶液 10、20、50、100、200、400、500 μL，用甲醇
980.00 μg/mL 的混合对照品溶液，于 4 ℃保存，加样回
分别定容至1 mL，制备系列质量浓度混合对照品溶液，
收率试验备用。
按“2.2.2”项下色谱与质谱条件进样分析，分别以各成分
（2）供试品溶液的制备：按“2.1.1（2）”项下方法制
质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，通过
备，摇匀，取1 mL溶液，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容，
HPLC-MS/MS联用系统中LabSolutions软件对各待测成
摇匀，经0.22 μm滤膜过滤，即得。
分进行线性拟合，结果见表3。
（3）空白对照溶液的制备：取甲醇适量，按“2.1.1
表3 山苦荬中7种成分的回归方程与线性范围
（2）”项下供试品溶液制备方法处理，即得。
2.2.2 色谱与质谱条件 成分 回归方程 r 线性范围/（ng/mL）
原儿茶酸 Y＝9.22×10 X+4.58×10 3 0.999 7 25.10～1 255.00
2
（1）色谱条件：以 Shim-pack GIST-HP C18 （2.1 mm× 绿原酸 Y＝6.91×10 X+1.99×10 4 0.999 5 503.00～25 150.00
4
2
100 mm，3 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-0.1% 甲酸溶液 异绿原酸A Y＝6.49×10 X－4.56×10 5 0.999 3 750.00～37 500.00
木犀草苷 Y＝1.42×10 X+2.30×10 5 0.999 2 196.00～9 800.00
3
（B）为流动相进行梯度洗脱（0.01～0.3 min，10%A→
芦丁 Y＝3.89×10 X+2.79×10 3 0.999 9 20.05～1 002.50
2
23%A；0.3～3.0 min，23%A→45%A；3.0～4.3 min，45%A→ 槲皮素 Y＝1.79×10 X－6.32×10 3 0.999 4 5.05～252.50
3
3
65%A；4.3～5.5 min，65%A→95%A；5.5～7.0 min， 木犀草素 Y＝1.47×10 X－3.90×10 4 0.999 8 42.00～2 100.00
中国药房 2023年第34卷第24期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 24 · 3009 ·