Page 46 - 《中国药房》2023年23期

contents of MDA and 8-OHdG and the protein expressions of TGF-β1， Fn and Col Ⅳ were increased significantly in model group
（P＜0.05）， while the contents of SOD， GSH-Px and the protein expressions of p-Akt， Nrf2， HO-1 in renal tissue were decreased
significantly （P＜0.05） ； the significant thickening of the basement membrane， accumulation of mesangial matrix，
glomerulosclerosis and interstitial fibrosis of the renal tubules were all found. Compared with model group， above indexes of mice
were all reversed significantly in TAB groups （P＜0.05）， and pathological changes were alleviated in a dose-dependent manner.
CONCLUSIONS TAB can improve blood glucose metabolism and kidney function and alleviate renal tubulointerstitial fibrosis in
DN model mice， the mechanism of which may be associated with activating the Akt/Nrf2/HO-1 signaling pathway and suppressing
ECM deposition.
KEYWORDS tournefolic acid B； diabetic nephropathy； oxidative stress； fibrosis； Akt/Nrf2/HO-1 signaling pathway

糖尿病肾病是糖尿病导致的肾脏病变，严重增加了 胶成像系统购自美国 Bio Rad 公司；强生稳豪倍优型血
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我国医疗经济负担 。其中，糖尿病引起的高血糖和炎 糖仪购自强生（中国）医疗器械有限公司。
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症反应是肾小管间质纤维化的主要促进因素 。抑制肾 1.2 主要药品与试剂
小管细胞外基质（extracellular matrix，ECM）沉积和转化 TAB（分子量为 312.063 3 kDa，纯度≥98%）由北京
生长因子β1 （transforming growth factor-β1，TGF-β1 ）分泌 药用植物研究所赠送；盐酸维生素 E 肠溶片（批号
可抑制Ⅳ型胶原蛋白（type Ⅳ collagen，Col Ⅳ）、纤维连 20201012，规格0.5 g）购自贵州圣济堂制药有限公司；链
接蛋白（fibronectin，Fn）等沉积，可有效阻滞肾小管间质 脲佐菌素（streptozotocin，STZ）（批号为 021J2742）均购
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纤维化，延缓糖尿病肾病的发展 。此外，核因子E2相关 自美国Sigma公司；血清尿酸、尿素氮、肌酐、超氧化物歧
因子 2/血红素氧合酶 1（nuclear factor erythroid 2-related 化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶
factor 2/heme oxygenase-1，Nrf2/HO-1）信号通路的抑制、 （glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialde‐
细胞内高血糖引起的活性氧（reactive oxygen species， hyde，MDA）、胰岛素、尿蛋白、尿微量白蛋白试剂盒（批
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ROS）产生 以及蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）/Nrf2 号分别为 20180927、c01311、A00512、S0101S、a00312、
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信号通路的激活 与糖尿病肾病的发展密切相关。 20190521、H20311、C03521、20170316）均购自南京建成
风轮菜Clinopodium chinense （Benth.） O. Ktze.为唇 生物工程研究所有限公司；过碘酸希夫（periodic acid-
形科风轮菜属多年生草本植物，其味辛、苦，性凉，具有 schiff，PAS）染色试剂盒、Masson 染色试剂盒（批号分别
抗肿瘤、抗炎、降血糖等多种药理作用，常用于治疗咽喉 为 20190712、20200305）均购自北京索莱宝科技有限公
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肿痛、糖尿病、胆囊炎等疾病 。紫丹酸 B（tournefolic 司；鼠源 8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxydeoxyguanosine，8-
acid B，TAB）是风轮菜的主要成分之一，具有抗氧化、抗 OHdG）单克隆抗体、兔源 TGF-β1单克隆抗体、Col Ⅳ多
炎、抗心肌缺血等多种生物活性，可减轻ECM的沉积和 克隆抗体、Fn 多克隆抗体、HO-1 单克隆抗体、Nrf2 多克
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肾小管间质纤维化 。此外，TAB 可以通过阻断大鼠脑 隆抗体、磷酸化 Akt（p-Akt）多克隆抗体、β-actin 单克隆
皮层神经元中 ROS 的积累来减轻谷氨酸引起的神经毒 抗 体（批 号 分 别 为 GR115731、5832、48508、5830、
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性 。同时，TAB还能通过激活Akt信号通路，在心肌缺 201734、305290、8226、25831）均购自美国 Abcam 公司；
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血再灌注损伤模型中发挥保护作用 。这些研究结果表 辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（批
明，风轮菜中的 TAB 具有潜在的药用价值，可以应用于 号33101）购自美国Jackson公司。
糖尿病肾病等相关疾病的治疗和预防。然而，目前尚不 1.3 动物与饲料
清楚 TAB 能否通过激活 Akt/Nrf2/HO-1 信号通路，进而 本研究所用动物为 4 周龄 SPF 级的 C57BL/6J 雄性
改善糖尿病肾病。基于此，本研究通过建立糖尿病肾病 小鼠 [10―11] ，共100只，体重为（15.0±1.5） g，购自北京维通利
模型小鼠初步探讨了 TAB 对其肾组织糖代谢、肾功能、 华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号为SCXK
氧化应激和肾小管间质纤维化的影响，并进一步研究 （京）2016-0011。本实验方案通过南昌医学院动物伦理
TAB基于Akt/Nrf2/HO-1信号通路的抗氧化和抗纤维化 委员会批准和审核（伦理号WY.No20191030b0601231），
作用，为糖尿病肾损伤的临床治疗提供参考。 并严格按照实验动物使用和保护的相关规定进行操作。
1 材料 饲养期间小鼠自由进食饮水，动物房内温度稳定在23～
1.1 主要仪器 25 ℃，每天日光灯照射 12 h。高脂饲料（批号 ZL20111-
Form Steri-Cycle型CO2细胞培养箱、Multiskan Sky‐ 0127312.5）购自北京华阜康生物科技股份有限公司。
High 型全波长酶标仪均购自美国 Thermo Fisher Scien‐ 2 方法
tific 公司；TE2000 型荧光显微镜购自日本 Nikon 公司； 2.1 分组、造模与给药
Mini-Protein 型垂直电泳系统、ChemiDoc MP 全能型凝 随机选取 12 只小鼠作为正常对照组，给予普通饮

· 2856 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 23 中国药房 2023年第34卷第23期