Page 40 - 《中国药房》2023年22期
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Compared  with  the  LPS+25  group，  the  above  indicators  of  formononetin+inhibitor  group  were  further  decreased，  while  those  of
          formononetin+activator  group  were  increased  significantly （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Formononetin  can  inhibit  LPS-induced
          epithelial  cell  apoptosis  and  improve  inflammatory  response，  and  the  mechanism  may  be  related  to  the  inhibition  of  the  PI3K/Akt
          signaling pathway.
          KEYWORDS     formononetin；  alveolar  epithelial  cells；  lipopolysaccharide；  phosphoinositide  3-kinase/protein  kinase  B  signaling
          pathway； apoptosis； inflammatory response


              急性肺损伤是由于各种原因所致肺组织结构发生                           动酶标仪、NanoDrop One 型超微量分光光度计（美国
          病理改变而引发的临床综合征，其病理改变包括肺泡上                            Thermo Fisher Scientific 公司），DXS_3 型倒置荧光显微
          皮细胞和肺泡毛细血管内皮细胞损伤、广泛性肺水肿、                            镜（上海缔伦光学仪器有限公司），DYCZ-24KF 型四板
          肺不张、肺内分流增加、肺顺应性下降，临床可表现为急                           垂直蛋白电泳仪（北京六一生物科技有限公司），7500型
          性、进行性、发作性呼吸困难，是一种临床较为常见的危                           实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 ABI 公
          重症。该病发病机制复杂，临床治疗以机械通气为主，                            司）等。
          但效果有限，使得患者的病死率居高不下                  [1―3] 。可见，探     1.2 主要药品与试剂
          寻新的急性肺损伤治疗方法及药物十分必要。                                    芒柄花素对照品（批号 94334，纯度≥98%）购自美
              中医将急性肺损伤归为“结胸”“暴喘”“喘脱”等范                        国 Sigma 公司；LPS（批号 J07HS174755，纯度≥98%）、
          畴，宜运用清热解毒、宣肺平喘、豁痰开窍、攻里通下等                           LY294002 对照品（PI3K/Akt 非特异性通路抑制剂，批号
              [4]
          治法 。芒柄花素为黄酮类化合物，在黄芪、鸡血藤等多                           J05GS150604，纯度≥98%）、SC79 对照品（PI3K/Akt 特
                                                              异性通路激活剂，批号F08J11F115126，纯度≥98%）、1%
          种中药中存在。研究指出，黄芪和鸡血藤具有清热解毒
                                                              青-链霉素双抗均购自上海源叶生物科技有限公司；胎
          的功效，对急性肺损伤有一定的改善作用，其主要成分
                                                              牛血清（FBS）购自美国 Gibco 公司；F-12K 培养基（批号
                                       [5]
          芒柄花素还具有一定的抗炎活性 。研究证实，芒柄花
                                                              20220617）、RIPA 裂解液均购自北京索莱宝科技有限公
          素可通过抗炎、抗氧化作用来减轻高氧介导的急性肺损
                                                              司；CCK-8 试剂盒、逆转录试剂盒、SYBR qPCR Master
          伤，同时对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的急性
                                                              Mix 试剂（批号分别为 C6205060、H2017011、H4001330）
          肺损伤也有保护作用          [6—7] ，但该成分上述作用的具体机
                                                              均购自翌圣生物科技（上海）股份有限公司；白细胞介素8
          制尚不明确。
                                                             （interleukin-8，IL-8）、TNF-α酶联免疫吸附测定（ELISA）
              磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B（phosphoinositide 3-
                                                              试剂盒（批号分别为Mar2022、Feb2022）均购自北京睿信
          kinase/protein kinase B，PI3K/Akt）信号通路在细胞中广
                                                              科 技 有 限 公 司 ；Hoechst  33258 染 色 试 剂 盒（批 号
          泛存在，是参与细胞生长、增殖、凋亡等生物学过程的重
                                                              20220304）购自江苏凯基生物技术股份有限公司；鼠抗
          要信号通路。现有研究证实，PI3K/Akt与炎症的发生密
                                                              人 PI3K、Akt、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）、β-
                       [8]
          切相关：Sun等 发现，大环内酯类抗菌药物可通过调节
                                                              肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的
          PI3K/Akt 信号通路来减轻肺癌和慢性阻塞性肺疾病的
                                                              山羊抗鼠 IgG 二抗（批号分别为 10017175、10022173、
                           [9]
          全身性炎症；Liu 等 发现，载脂蛋白酶和磷酸鞘氨醇复
                                                              10022023、10021787、20000425）均购自武汉三鹰生物技
          合物可通过 PI3K/Akt 信号通路来减轻肿瘤坏死因子 α
                                                              术有限公司；鼠抗人磷酸化 PI3K（phosphorylated PI3K，
         （tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的内皮细胞损伤和            p-PI3K）单克隆抗体（批号BJ07207167）购自上海沪震实
          炎症反应；另有研究指出，抑制 PI3K/Akt 信号通路与减                      业有限公司。
                                     [10]
          轻 LPS 诱导的急性肺损伤相关 。基于此，本研究拟通                         1.3 细胞株
          过LPS诱导构建体外肺泡上皮细胞损伤模型，探究芒柄                               肺癌人肺泡基底上皮细胞A549购自武汉普诺赛生
          花素对其凋亡和炎症反应的影响及潜在机制，以期为深                            命科技有限公司，于－80 ℃下冻存，备用。
          入研究该化合物用于急性肺损伤的防治提供参考。                              2 方法
          1 材料                                                2.1 细胞培养
          1.1 主要仪器                                                取冻存的 A549 细胞，复苏后，接种于 F-12K 培养基
              本研究所用主要仪器包括 ZF-288 型凝胶成像系统                     （含10%FBS、1%青-链霉素双抗）中，于37 ℃、5%CO2条
         （上海金鹏科技有限公司），BPN-40RHP 型 CO2培养箱                      件下培养、传代（密度＞80%），取第4代且处于对数生长
         （上海一恒科学仪器有限公司），Multiskan Ascent型全自                   期的细胞用于实验。


          · 2722 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22                            中国药房  2023年第34卷第22期
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