Page 35 - 《中国药房》2023年22期

2.2 指纹图谱的建立 记录色谱图。将所得色谱信息导入《中药色谱指纹图谱
采用 HPLC 法建立 10 批玉叶金花总皂苷样品的指 相似度评价系统（2012版）》进行色谱峰匹配，以S1样品
纹图谱。 图谱为参照图谱，共标定11个共有峰；采用中位数法生
2.2.1 色谱条件 成对照指纹图谱（R），采用多点校正法生成叠加图谱。
以Techmate C18-ST（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）为色 结果见图1。
谱柱，乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱（0～25 5 6 7 8 11
120 1 2 3 4 9 10 R
min，36%A；25～50 min，36%A→38%A；50～60 min， S10
100 S9
38%A→40%A；60～70 min，40%A→45%A）；流 速 为 80 S8
S7
1 mL/min；柱温为 25 ℃；检测波长为 265 nm；进样体积 U/mV 60 S6
S5
为10 μL。 40 S4
20 S3
2.2.2 溶液的制备 S2
0 S1
（1）混合对照品溶液：精密称取 mussaendoside H、 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t/min
mussaendoside U、mussaglaoside C、mussaendoside G、 图1 10批玉叶金花总皂苷HPLC叠加图谱及对照指纹
mussaendoside O对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别 图谱
为33.02、53.40、68.28、40.96、88.17 μg/mL的混合对照品
（2）相对保留时间和相对峰面积的计算：以 11 号峰
溶液，备用。
为参照峰，计算得10批玉叶金花总皂苷指纹图谱中各共
（2）供试品溶液：取玉叶金花总皂苷，粉碎，精密称
有峰相对保留时间的RSD均小于1.0%（n＝10），提示10
取粉末10 mg至具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，称
批样品的成分种类相对稳定；相对峰面积的 RSD 为
重，超声处理40 min，放至室温，再次称重后用甲醇补足
1.37%～2.61%（n＝10），提示 10 批样品各成分的含量差
失重，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
异不大。
2.2.3 方法学考察
（3）相似度评价：采用《中药色谱指纹图谱相似度评
（1）精密度试验：取同一批玉叶金花总皂苷（编号
价系统（2012 版）》对 10 批玉叶金花总皂苷样品进行相
S1），粉碎，取粉末约10 mg，精密称定，按“2.2.2（2）”项下
似度评价。结果显示，与对照指纹图谱相比，10 批玉叶
方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件连续进
金花总皂苷样品的相似度分别为 0.991、0.986、0.989、
样 6 次，以 11 号峰（峰面积较大且出峰稳定）为参照峰，
0.989、0.960、0.980、0.978、0.940、0.991、0.957，提示 10 批
计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均
玉叶金花总皂苷的整体品质基本稳定。
小于2.0%（n＝6），表明方法精密度良好。
（4）共有峰指认：以混合对照品溶液的色谱图（按
（2）稳定性试验：取同一批玉叶金花总皂苷（编号
“2.2.1”项下色谱条件进样分析所得，图 2）为参照，通过
S1），粉碎，取粉末约10 mg，精密称定，按“2.2.2（2）”项下
比较各色谱峰的保留时间和紫外吸收光谱特征，共指认
方法制备供试品溶液，分别于室温放置 0、2、4、8、12、24
出 5 个共有峰，3、7、8、9、11 号峰依次为 mussaendoside
h时按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，以11号峰为参照
H、mussaendoside U、mussaglaoside C、mussaendoside G、
峰，计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD
mussaendoside O。
均小于1.0%（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置24 h
120
内稳定性良好。 8 11
100
（3）重复性试验：取同一批玉叶金花总皂苷（编号 7
80
S1），粉碎，取粉末约 10 mg，共 6 份，精密称定，按“2.2.2 U/mV 60 9
（2）”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条 40 3
件进样分析，以11号峰为参照峰，计算得各共有峰相对 20
0
保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 2.0%（n＝6），表 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t/min
明方法重复性良好。
3：mussaendoside H；7：mussaendoside U；8：mussaglaoside C；
2.2.4 指纹图谱的建立与分析 9：mussaendoside G；11：mussaendoside O。
（1）指纹图谱的建立和共有峰的标定：取 10 批玉叶 图2 混合对照品溶液的HPLC图
金花总皂苷，粉碎，取粉末，分别按“2.2.2（2）”项下方法 2.3 5种三萜皂苷类成分的定量分析
制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样分析， 采用HPLC法进行定量分析。

中国药房 2023年第34卷第22期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 22 · 2717 ·