Page 37 - 《中国药房》2023年22期

7 d，空白组和模型组小鼠灌胃等体积 0.5% 羧甲基纤维 花总皂苷的肝保护作用是通过不同成分协同实现的，
素钠溶液。末次给药后 1 h，模型组和各药物组小鼠均 11、9、8 号峰对应成分（即 mussaendoside O、mussaendo‐
单次灌胃 0.35%CCl4-花生油溶液 10 mL/kg 以复制急性 side G、mussaglaoside C）可能是玉叶金花总皂苷发挥肝
肝损伤模型（以血清 ALT、AST 含量较空白组显著升高 保护作用的主要药效成分。
为造模成功），空白组小鼠单次灌胃等体积花生油。 表4 玉叶金花总皂苷指纹图谱各共有峰与肝保护药效
指标的关联度
造模后，各组小鼠禁食 16 h，摘眼球取血，以 3 000
共有峰峰号 ALT含量 AST含量 TNF-α含量 IL-6含量 IL-1β含量
r/mim 离心 10 min，分离血清；小鼠脱颈椎处死，分离其
1 0.602 0.622 0.601 0.687 0.630
肝组织，保存于液氮中。取血清样品，使用酶标仪检测 2 0.646 0.637 0.593 0.618 0.612
3 0.622 0.757 0.676 0.758 0.765
其中 ALT、AST 含量。取保存于液氮中的肝组织适量，
4 0.610 0.585 0.623 0.635 0.607
加生理盐水制成 10% 组织匀浆，于 4 ℃下以 3 000 r/min 5 0.668 0.611 0.689 0.717 0.679
离心10 min，取上清液，使用酶标仪检测其中TNF-α、IL- 6 0.651 0.717 0.658 0.742 0.642
7 0.639 0.697 0.723 0.792 0.691
6、IL-1β含量。上述检测均严格按照相应试剂盒说明书 8 0.690 0.833 0.722 0.779 0.792
操作。采用 SPSS 24.0 软件对数据进行统计分析，数据 9 0.691 0.806 0.754 0.820 0.804
10 0.735 0.672 0.644 0.654 0.710
以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步
11 0.757 0.789 0.795 0.804 0.733
两两比较采用LSD-t检验，检验水准α＝0.05。 3 讨论
结果（表3）显示，与空白组比较，模型组小鼠血清中 [12]
本研究参照相关文献 建立了玉叶金花总皂苷
ALT、AST含量和肝组织中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显 HPLC 指纹图谱，方法学考察结果显示，该方法的精密
著升高（P＜0.01）；与模型组比较，各药物组小鼠的上述 度、重复性、稳定性均较好。相似度评价结果表明，不同
指标均普遍降低，大部分差异有统计学意义（P＜0.05或 批次玉叶金花总皂苷样品的化学成分组成一致性较好，
P＜0.01）。 含量差异不大。通过与混合对照品比对，指认了其中 5
表3 各组小鼠血清中ALT、AST含量和肝组织中TNF- 个 共 有 峰 ，分 别 为 mussaendoside O（11 号 峰）、mus‐
α、IL-6、IL-1β含量比较（x±s，n＝10） saendoside G（9 号峰）、mussaglaoside C（8 号峰）、mus‐
组别 ALT/（U/L） AST/（U/L） TNF-α/（pg/mg） IL-6/（pg/mg） IL-1β/（pg/mg） saendoside U（7 号峰）、mussaendoside H（3 号峰）。含量
空白组 6.33±2.73 35.92±13.29 61.93±13.55 12.76±3.63 12.65±2.34
模型组 149.59±12.81 a 161.07±12.01 a 95.50±20.63 a 17.59±7.22 a 18.06±5.77 a 测定结果显示，10 批玉叶金花总皂苷样品中，mus‐
阳性对照组 32.54±13.26 b 100.53±24.95 b 73.81±18.57 b 14.55±5.43 b 15.73±4.32 b saendoside H、mussaendoside U、mussaglaoside C、mus‐
S1组 100.49±47.64 c 157.56±4.99 b 81.62±22.61 c 16.03±8.31 b 16.98±6.05 c
S2组 50.29±14.84 b 127.08±8.50 b 75.44±17.58 b 15.78±5.54 b 17.51±5.79 b saendoside G、mussaendoside O 的 平 均 含 量 分 别 为
S3组 45.50±19.39 b 137.43±20.35 b 69.36+13.45 b 14.12±6.55 b 16.46±4.51 c 0.01～0.05、0.10～0.21、0.10～0.18、0.03～0.08、0.20～
S4组 49.75±21.25 b 145.24±11.33 b 74.69±16.36 b 15.98±5.21 c 15.87±4.08 b 0.40 mg/g。
S5组 40.07±9.68 b 97.60±1.88 b 66.51±10.22 b 13.92±6.03 c 15.90±6.11 c
S6组 53.45±16.70 b 147.94±5.51 b 80.03±20.09 c 16.36±6.54 17.33±7.23 b 血清ALT、AST含量是评估肝损伤的常用指标。当
S7组 45.93±17.57 b 129.01±12.70 c 77.96±15.17 b 16.23±7.89 c 17.59±4.09 c 肝细胞出现轻微损伤时，细胞发生裂解，大量的 ALT、
S8组 44.02±8.86 b 115.72±37.69 b 68.39±23.75 c 15.01±4.33 b 14.98±4.24 c AST等转氨酶便会游离出来，从而导致肝细胞外及血清
S9组 62.32±20.95 c 149.17±1.56 b 83.77±19.84 19.88±8.09 18.03±7.13
S10组 95.12±64.08 c 156.95±2.51 b 92.13±18.62 14.34±8.11 c 17.94±8.49 中的转氨酶含量急剧升高，故上述指标含量的上升程度
[13]
a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组 可反映肝细胞的受损程度 。研究发现，肝病患者体内
比较，P＜0.05。
促炎因子的含量较高，其中TNF-α、IL-6、IL-1β等由肝巨
2.5 玉叶金花总皂苷肝保护作用的谱效关系分析 [14]
噬细胞和外周血单核细胞分泌，是重要的炎症因子 。
[11]
采用灰色关联度分析法 ，以各组肝损伤小鼠血清
因此，本研究以血清中ALT、AST含量和肝组织中TNF-
中ALT、AST含量和肝组织中TNF-α、IL-6、IL-1β含量为 α、IL-1β、IL-6含量为指标，初步评价了玉叶金花总皂苷
母序列，以玉叶金花总皂苷指纹图谱的11个共有峰峰面 的肝保护作用。结果显示，玉叶金花总皂苷具有一定的
积为子序列，设分辨系数 ρ 为 0.5，计算各共有峰峰面积 肝保护作用，可能通过抑制小鼠炎症因子的释放来减轻
与各药效指标的关联度。结果（表 4）显示，各共有峰峰 CCl4所致的急性肝损伤。本研究进一步采用灰色关联
面积与 ALT、AST、TNF-α、IL-6、IL-1β 含量的关联度分 度分析法对玉叶金花总皂苷肝保护作用的谱效关系进
别为 0.602～0.757、0.585～0.833、0.593～0.795、0.618～ 行了评价，结果表明，玉叶金花总皂苷的肝保护作用是
0.820、0.607～0.804，关联度均较大的依次为 11、9、8 号 多种成分共同作用的结果，其中 mussaendoside O、mus‐
峰；各共有峰对上述指标的贡献大小不一，提示玉叶金 saendoside G、mussaglaoside C可能是其主要药效成分。

中国药房 2023年第34卷第22期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 22 · 2719 ·