Page 43 - 《中国药房》2023年22期
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3.3.3 芒柄花素对 PI3K/Akt 信号通路关键蛋白表达的                   化合物，作为黄芪、鸡血藤等多种中药的活性黄酮类成
          影响                                                 分，其具有抗肿瘤、清除自由基、抗炎和改善雌激素水平

              与对照组比较，模型组细胞中p-Akt、p-PI3K蛋白的                   等药理活性     [5―7] ，但其对LPS致急性肺损伤的作用机制尚
          相对表达量均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，LPS+                     不明确。基于此，本研究进一步以不同浓度的芒柄花素
          25 组和抑制剂组细胞中 p-Akt、p-PI3K 蛋白的相对表达                  干预 LPS 诱导的 A549 细胞，结果发现，25 μmol/L 的芒
          量均显著降低（P＜0.05）；与LPS+25组比较，芒柄花素+                    柄花素可使模型细胞活力显著升高，炎症因子 IL-8、
          抑制剂组细胞中 p-Akt、p-PI3K 的相对表达量均显著降                    TNF-α 的分泌水平显著降低，提示 25 μmol/L 的芒柄花
          低，而芒柄花素+激活剂组细胞中 p-Akt、p-PI3K 的相对                   素缓解LPS致细胞损伤的效果较好，因此将该浓度作为
          表达量均显著升高（P＜0.05）。结果见图5。                            后续实验芒柄花素的干预浓度。后续实验发现，LPS+25
                                                             组细胞 IL-8、TNF-α 的分泌水平和 mRNA 表达水平、细
              Akt                                  60 kDa
                                                             胞凋亡率均较模型组显著降低，提示芒柄花素能明显抑
             p-Akt                                 62 kDa    制LPS诱导的A549细胞凋亡并缓解炎症反应。以上结
                                                             果表明，芒柄花素能改善LPS引起的A549细胞损伤，具
             PI3K                                  110 kDa
                                                             有一定的抗炎、抗凋亡作用。
            p-PI3K                                 123 kDa
                                                                 PI3K/Akt信号通路是一条重要的信号转导通路，可
            β-actin                                42 kDa    在细胞分化、凋亡、增殖、迁移等多种生物过程中发挥作
                                                                          [16]
                                                               [15]
                                                             用 。Liang等 研究发现，右美托咪定可改善大鼠肺缺
                   Ⅰ    Ⅱ     Ⅲ    Ⅳ     Ⅴ     Ⅵ
                            A.蛋白表达电泳图                        血再灌注引起的肺损伤，这种作用可能是通过激活
                                                 Ⅰ                                            [17]
               1.5                               Ⅱ           PI3K/Akt 信号通路来实现的；Wang 等 研究发现，骨髓
                                                 Ⅲ
                                                             细胞 2 上表达的受体可通过 PI3K/Akt 信号通路来改善
                                                 Ⅳ
                                                 Ⅴ
              蛋白表达水平       a  b  c           b  b  c         阿尔茨海默病模型小鼠神经炎症反应和认知障碍。
               1.0
                                            a
                                                 Ⅵ
                                                             PI3K和Akt蛋白是PI3K/Akt信号通路的关键蛋白，可参
                              b
               0.5
                               c                c            与LPS诱导的急性肺损伤，并可抑制氧化应激介导的细
                0                                            胞凋亡和自噬，故该信号通路成为急性肺损伤研究的关
                    Akt                     p-Akt                   PI3K                  p-PI3K  [15]
                            B.蛋白表达柱形图                        键靶点 。本研究结果显示，模型组细胞中 p-Akt、p-
             Ⅰ：对照组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：LPS+25组；Ⅳ：抑制剂组；Ⅴ：芒柄花              PI3K蛋白的相对表达量均较对照组显著上调，提示LPS
         素+抑制剂组；Ⅵ：芒柄花素+激活剂组；a：与对照组比较，P＜0.05；
                                                             诱导能够激活细胞的 PI3K/Akt 信号通路；LPS+25 组和
         b：与模型组比较，P＜0.05；c：与LPS+25组比较，P＜0.05。
                                                             抑制剂组细胞中 p-Akt、p-PI3K 蛋白的相对表达量均较
         图5 芒柄花素对LPS诱导的A549细胞PI3K/Akt信号
                                                             模型组显著下调，提示芒柄花素和非特异性通路抑制剂
               通路关键蛋白表达的影响（x±s，n＝3）
                                                             LY294002均能抑制细胞的PI3K/Akt信号通路。
          4 讨论                                                   为阐释芒柄花素对LPS致A549细胞炎症和凋亡的
              急性肺损伤是多种炎症介质、免疫细胞共同参与的                         抑制作用机制，本研究同时以芒柄花素和非特异性通路
          病理过程，由创伤、感染、烧伤及休克等多种因素引发，                          抑制剂LY294002对LPS诱导的A549细胞进行干预（为
                                   [14]
          具有较高的发病率及病死率 。由于现有治疗手段效                            排除 LY294002 对其他蛋白的抑制作用，本研究同时设
          果有限，故挖掘新的有效治疗药物备受研究者关注。                            置了单独的抑制剂组），结果显示，芒柄花素+抑制剂组
              本研究首先以LPS诱导A549细胞构建体外肺泡上                       细胞中 IL-8、TNF-α 的分泌水平和 mRNA 表达水平，细
          皮细胞损伤模型，结果发现，与对照组比较，模型组细胞                          胞凋亡率，p-Akt、p-PI3K蛋白的相对表达量均显著低于
          的炎症因子（IL-8、TNF-α）分泌显著增多，细胞活力显著                     LPS+25 组。为进一步反向验证该作用机制，本研究还
          下降，说明 LPS 能促进 A549 细胞炎症因子释放并抑制                     以芒柄花素和特异性通路激活剂 SC79 对 LPS 诱导的

          细胞活力，体外急性损伤细胞模型构建成功。                               A549 细胞进行干预，结果显示，芒柄花素+激活剂组细
              中医药对改善急性肺损伤具有积极作用，这种作用                         胞中上述指标的改变受到逆转。这提示芒柄花素可通
          可能是通过干预细胞信号转导、炎症介质释放、免疫细                           过抑制PI3K/Akt信号通路来发挥对LPS诱导的A549细
          胞活化等多途径而实现的。芒柄花素是一种异黄酮类                            胞炎症和凋亡的改善作用。


          中国药房  2023年第34卷第22期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 22    · 2725 ·
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