Page 80 - 《中国药房》2023年19期

130 3 份供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样，记录色谱图，
120
110 2 4 18 按外标一点法计算8种待测成分的含量。结果显示，各
100 1 5 6 7 8 910 11 12 1314 15 1617 19 20
90 JZ 成分含量的 RSD 为 0.23%～1.35%（n＝6），表明方法重
80 CT
U/mV 70 THH 复性良好。
60
50 ST 2.5.5 加样回收率试验
40
30 FW
20 DC 取6份已知成分含量的诃子SP（编号S1）适量，按质
10 SP
0 量比 1∶1 加入各对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min 溶液，按“2.3”项下色谱条件进样检测，记录色谱图，计算
A.诃子SP及不同炮制品的HPLC对照指纹图谱
加样回收率。结果显示，诃子次酸、没食子酸、安石榴
30 苷、柯里拉京、诃黎勒酸、鞣花酸、1，2，3，4，6-O-五没食
25 15 20
20 子酰葡萄糖、诃子酸的加样回收率分别为 100.3%～
U/mV 15
10 3 12 101.7%、98.60%～102.3%、99.76%～102.6%、100.4%～
2 6 8 18
5 19 102.5%、98.43%～101.8%、99.6%～102.5%、98.24%～
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 102.4%、98.39%～101.3%，RSD 分 别 为 0.35%、1.14%、
t/min
B.混合对照品的HPLC图 0.83%、0.75%、0.53%、0.86%、1.12%、0.94%（n＝6），表明
2：诃子次酸；3：没食子酸；6：安石榴苷A；8：安石榴苷B；12：柯里 该方法准确度良好。
拉京；15：诃黎勒酸；18：鞣花酸；19：1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖； 2.5.6 含量测定
20：诃子酸。
图1 诃子 SP 及不同炮制品的 HPLC 对照指纹图谱和 取“2.2.2”项下诃子SP及不同炮制品的供试品溶液
（各10批），分别按“2.3”项下色谱条件进样测定，采用外
混合对照品的HPLC图
标一点法计算样品中8种成分的含量，并计算平均含量，
条件进样分析，分别以信噪比3∶1和10∶1对应的质量浓 结果见表3。结果显示，诃子经过不同炮制方法炮制后，
度作为检测限和定量限（其中安石榴苷峰面积为安石榴 8 种待测成分的含量均发生了改变，其中 CT、JZ 由于经
苷 A 与安石榴苷 B 峰面积之和）。线性关系及检测限、 过高温及长时间蒸制，其8种待测成分的含量变化较其
定量限考察结果见表2。 他炮制品更为明显。
表2 线性关系及检测限、定量限考察结果 表3 诃子SP及不同炮制品中8种成分的含量测定结果
线性范围 检测限/ 定量限/ （mg/g，n＝10）
成分 回归方程 R 2
/ （µg/mL） （µg/mL） （µg/mL）
待测成分 SP THH DC FW ST CT JZ
6
诃子次酸 y＝7.435×10 x+2.884×10 4 0.999 9 5.00～320.00 0.17 0.68 诃子次酸 18.82 23.14 16.59 13.97 18.90 1.61 46.34
没食子酸 y＝2.148×10 x+1.216×10 5 0.999 9 10.52～673.00 0.39 1.57 没食子酸 8.49 14.75 22.46 35.70 26.21 12.07 31.71
7
安石榴苷 y＝1.129×10 x－8.544×10 3 0.999 9 2.52～131.28 0.22 0.86
7
安石榴苷 30.19 22.75 17.76 14.58 17.80 1.95 5.88
7
柯里拉京 y＝1.636×10 x－8.385×10 3 0.999 9 2.34～149.76 0.31 0.94 柯里拉京 30.87 29.55 22.69 19.39 22.13 3.16 3.27
7
诃黎勒酸 y＝1.497×10 x－2.967×10 4 0.999 9 8.79～562.50 0.46 1.38 诃黎勒酸 129.51 125.71 104.26 94.18 112.00 4.96 6.37
鞣花酸 y＝1.666×10 x－8.765×10 3 0.999 9 4.28～272.00 0.35 1.05
7
鞣花酸 73.60 70.26 108.09 118.86 107.44 273.15 44.54
5
1，2，3，4，6-O-五没 y＝2.852×10 x+4.803×10 3 0.999 9 1.49～95.36 0.13 0.67 1，2，3，4，6-O-五没食子酰葡萄糖 17.01 17.10 10.14 6.44 10.40 0.61 1.89
食子酰葡萄糖 诃子酸 223.93 184.79 186.97 108.39 184.88 6.17 1.31
诃子酸 y＝2.583×10 x+1.875×10 4 0.999 8 16.76～1 072.50 0.67 2.68
7
2.6 诃子SP及不同炮制品的抗氧化能力测定
2.5.2 精密度试验
采 用 DPPH 自 由 基 清 除 法 进 行 抗 氧 化 能 力 测
取诃子SP（编号S1）按“2.2.2”项下方法制备供试品
定 [11―12] 。精密量取“2.2.2”项下诃子 SP 及不同炮制品抗
溶液，按“2.3”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。
氧化活性用供试品溶液各3 mL，分别置于具塞试管中，
结 果 显 示 ，8 种 待 测 成 分 色 谱 峰 峰 面 积 的 RSD 为
精密加入DPPH自由基溶液（0.25 mmol/L）1 mL，混合摇
0.36%～1.07%（n＝6），表明方法精密度良好。
匀，密塞，室温避光放置30 min。采用紫外-可见分光光
2.5.3 稳定性试验
度计测定 517 nm 波长处各样品的吸光度（A1 ）。以等体
取诃子SP（编号S1）按“2.2.2”项下方法制备供试品 积 50% 乙腈代替 DPPH 自由基溶液，同法操作，测定其
溶液，分别在制备后 0、2、4、8、12、24 h 按“2.3”项下色谱 吸光度（A2 ）；以等体积 50% 乙腈代替样品溶液，同法操
条件进样，记录色谱图。结果显示，8种待测成分色谱峰 作，测定其吸光度（A0 ）。各样品均测定 3 次，取平均值，
峰面积的 RSD 为 0.28%～1.12%（n＝6），表明供试品溶 计算 DPPH 自由基清除率：DPPH 自由基清除率（%）＝
液在制备后24 h内稳定性良好。 [1－（A1－A2 ）/A0]×100%。借助 SPSS 22.0 软件中 Probit
2.5.4 重复性试验 分析功能，通过 Logit法计算诃子 SP 及不同炮制品的自
取诃子 SP（编号 S1）按“2.2.2”项下方法平行制备 6 由基半数清除浓度（IC50 ）。结果显示，诃子SP、DC、FW、
· 2374 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 19 中国药房 2023年第34卷第19期