Page 53 - 《中国药房》2023年19期
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发作，可引起海马神经元大量凋亡坏死，常伴随认知功                           IL-1β 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为
          能障碍，主要表现为患者学习记忆能力降低，严重威胁                           ml102828、ml002859、ml037373）购自上海酶联生物科技
                    [2]
          其身心健康 。研究发现，神经炎症与癫痫的发生、发展                          有限公司；RIPA 蛋白裂解液、BCA 蛋白定量试剂盒、
                                  [3]
          以及认知功能障碍密切相关 。小胶质细胞作为神经系                           ECL 显影液（批号分别为 89900、NCI3225、32209）购自
          统内参与调节神经炎症的关键免疫细胞，其过度激活会                           英潍捷基（上海）贸易有限公司；兔源 α7nAChR 多克隆
          导致炎症因子的大量产生，引起中枢神经元损伤，是导                           抗体、小鼠源离子钙接头蛋白 1（ionized calcium-binding
                              [4]
          致TLE的病理因素之一 。因此，抑制小胶质细胞活化，                         adapter  molecule-1，IBA-1）单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为
          减轻神经炎症导致的神经元损伤，可能成为TLE的治疗                          ab10096、ab283319）购自英国 Abcam 公司；兔源 NF-κB
          新策略。                                               p65 多克隆抗体、兔源磷酸化 NF-κB p65（p-NF-κB p65）
              胆 碱 能 抗 炎 通 路（cholinergic  anti-inflammatory   多克隆抗体（批号分别为 8242、3033）购自美国 Cell
          pathway，CAP）可通过刺激迷走神经释放乙酰胆碱（ace‐                   Signaling 公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 二
          tylcholine，ACh），并与巨噬细胞等免疫细胞上的 α7 烟                 抗（批号 BA1055）购自武汉博士德生物工程有限公司；
          碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor，      Alexa Fluor 594标记的羊抗小鼠IgG二抗（批号115-585-
          α7nAChR）相结合来减轻机体炎症反应，是体内重要的                        146）购自美国 Jackson 公司；尼氏染色试剂盒（批号
          神经免疫调节通路；其中，α7nAChR是CAP的核心信号                       C0117）购自上海碧云天生物技术有限公司等。
          受体，除分布在外周组织器官外，海马小胶质细胞上也                           1.3 主要仪器
          有大量分布 ，激活 α7nAChR 能够抑制小胶质细胞的                           Morris 水迷宫购自成都泰盟仪器有限公司；RT-
                    [5]
              [6]
          活化 。核因子 κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是细胞内            6100 型酶标仪购自美国 Rayto 公司；164-5070 型蛋白电
                                                                            +
          的信号分子，α7nAChR 被激活后，能够抑制 NF-κB 的                    泳仪、Chemi XRS 型凝胶成像系统购自美国 BioRad 公
                                            [7]
          磷酸化和核迁移，降低促炎因子的表达 。由此可知，                           司；EMUC7FC7型冷冻超薄切片机购自德国Leica公司；
          α7nAChR/NF-κB 信号通路具有调节小胶质细胞激活、                     Axio Observe A1 型倒置相差荧光显微镜购自德国 Zeiss
          抑制中枢炎症反应的作用。PNU-282987（分子式为                        公司等。
          C14H17ClN2O）是一种固态的、晶体状的高选择性α7nAChR                 2 方法
          激动剂，可作用于α7nAChR/NF-κB信号通路，减轻阿尔                     2.1 分组、给药与造模
                              [9]
                  [8]
          茨海默病 、脓毒症脑病 等疾病的中枢炎症反应，保护                              大鼠适应性饲养2周后开始实验。将大鼠随机分为
                [10]
          神经元 ，但其能否在 TLE 中发挥作用还未见相关报                         对照组、模型组、PNU-282987 组和 MLA+PNU-282987
          道。基于此，本研究首先建立TLE模型大鼠，考察PNU-                        组，每组 15 只。除对照组外，其余各组大鼠均复制 TLE
          282987 对模型大鼠认知功能的影响，并基于 α7nAChR/                   模型，具体参考文献[11]方法：先腹腔注射氯化锂（127
          NF-κB信号通路初探其作用机制，以期为TLE的治疗提                        mg/kg）24 h后，再腹腔注射东莨菪碱（1 mg/kg）以阻断腹
          供新思路与新靶点。                                          腔注射毛果芸香碱的外周胆碱能效应；注射东莨菪碱
          1 材料                                               30 min 后，腹腔注射毛果芸香碱（35 mg/kg）。观察大鼠
          1.1 实验动物                                           癫痫发作情况，按照 Racine 标准判断癫痫发作程度，当
              本研究所用动物为SPF级SD雄性大鼠，共60只，体                      其发生癫痫的级别超过Ⅳ级，持续时间超过1 h时，表明
          重290～310 g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提                       造模成功。随即给药，其中，PNU-282987组大鼠腹腔注
                                                                                  [10]
          供，动物生产许可证号为SCXK（京）2019-0008。所有大                    射 3 mg/kg PNU-282987 （临用时以生理盐水溶解）；
          鼠均于昼夜节律自然变化、室温 23～25 ℃、相对湿度                        MLA+PNU-282987组大鼠先腹腔注射6 mg/kg MLA（剂
          50%～60%的环境下饲养，自由摄食、饮水。本实验获得                        量根据前期预实验结果设置，临用时以生理盐水溶解）
          南阳医学高等专科学校伦理委员会批准，批准号为南阳                           阻 断 α7nAChR，30  min 后 再 腹 腔 注 射 3  mg/kg  PNU-
          医专动伦[2022]第005号。                                   282987；对照组与模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水。
          1.2 主要药品与试剂                                        腹腔注射时间统一在每天上午9：00，每天1次，连续2周。
              PNU-282987（批号M06398，纯度99.37%）购自北京              2.2 大鼠癫痫发作行为观察
          百奥莱博科技有限公司；甲基牛扁亭（methyllycaconitine，                   连续给药 2 周后，观察大鼠癫痫发作行为并根据
          MLA）（α7nAChR 阻断剂，批号 M-168，纯度 99.03%）购              Racine标准对其进行评分，记录大鼠癫痫发作持续时间。
          自美国Sigma公司；氯化锂（批号L511）购自湖北威德利                      2.3 大鼠认知功能检测
          化学试剂有限公司；东莨菪碱（批号H32022184）购自徐                          末次给药后的第 2 天，采用 Morris 水迷宫实验检测
          州莱恩药业有限公司；毛果芸香碱（批号YJ102834）购自                      各组大鼠认知水平，整个测试时间为6 d，每天测试2次。
          上海一基实业有限公司；肿瘤坏死因子ɑ（tumor necrosis                  其中，第 1～5 天为定位航行实验：将大鼠分别从 4 个不
          factor-α，TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）和       同象限面向池壁放入水中，记录其在60 s内从入水到找


          中国药房  2023年第34卷第19期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 19    · 2351 ·
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