Page 57 - 《中国药房》2023年18期

assembled peptides can be improved. Regulating the position of Fc in the peptide sequence could regulate the self-assembly behavior
and antibacterial effect of the self-assembled peptides.
KEYWORDS antibacterial peptides； self-assembly； isomerism； Fenton reaction

细菌感染是威胁人类健康的重要卫生问题之一，抗 有限公司]，Tecnai G2 型生物型透射电子显微镜（trans‐
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生素的出现和应用为治疗细菌感染做出了巨大贡献 。 mission electron microscope，TEM）（美 国 FEI 公 司），
然而，近年来抗生素滥用导致了多种细菌耐药现象加 BX53-611 型研究级正置荧光显微镜（日本 Olympus 公
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剧，抗生素的抗菌能力变得越来越有限 。天然抗菌肽 司）等。
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是一种应用前景广泛的抗菌剂 ，通常带有正电荷，可被 1.2 主要药品与试剂
吸附到细菌细胞膜的表面，通过“桶板”模型、“地毯”模 Rink-酰胺树脂、赖氨酸[Fmoc-Lys（Mtt）-OH，K]、赖
型等方式来损伤细胞膜，以杀死细菌，很少引起细菌耐 氨酸[Fmoc-Lys（Boc）-OH，K]、Fmoc-L-苯丙氨酸（F）、苯
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药 ，且在此基础上衍生设计的自组装阳离子多肽相较 并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐、二甲基甲
于天然抗菌肽，具有便于合成、设计简单、容易修饰、结 酰胺（DMF）均购自吉尔生化（上海）有限公司，批号分别
构可调的优点 [5―7] 。但对于阳离子抗菌肽，单一的抗菌 为 GLS211122-49101、GLS20080-3-36813、GLS220802-36802、
机制往往要求较高的表面电位，这可能会引起一定的细 GLS200919-35701、GLS201005-00702、GLS21098-2210；
胞毒性和溶血性，因此，引入其他抗菌机制设计协同抗 N-Boc-N′-三苯甲基-L-组氨酸（H）、硫代黄素T（ThT）均
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菌纳米材料成为了近年来研究的热点 。 购自上海毕得医药科技股份有限公司，批号分别为
芬顿反应产生的活性氧（reactive oxygen species， BSA288、BNP774；Fc 甲酸（批号 C11558015）购自乐研
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ROS）可协同抗菌 。ROS 引起的氧化应激会损害核酸 试剂有限公司；正辛酸（C8 ）、三异丙基硅烷、4-甲基-哌
骨架，同时还可通过诱导细胞死亡信号通路的激活来进 啶、30%过氧化氢（H2O2 ）溶液、2，7-二氯荧光素二乙酸酯
行细胞内杀菌，细菌感染引起的微酸性环境能够明显促 （DCFH-DA）均购自上海泰坦科技股份有限公司，批号
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进芬顿反应的发生，从而实现对细菌的特异性损伤 。 分别为 T912082、77927158、A52011、P2047146、P2033707；
因此，如何有效地与芬顿反应偶联以达到更好的协同抗 LB肉汤（批号1227K031）购自上海索莱宝生物科技有限
菌效果是学者们研究的重点。研究表明，具有相同氨基 公司；CCK-8试剂、杜氏改良Eagle培养基均购自上海碧
酸组成但顺序或者空间位置不同的肽序列对纳米结构 云天生物技术有限公司，批号分别为C0043、8122476。
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的最终自组装具有显著影响，如Ma等 合成了2种异构 1.3 菌株与细胞
肽 Ac-RFSFSFR-NH2 和 Ac-SFRFRFS-NH2，二者含有相 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant
同的丝氨酸、精氨酸和苯丙氨酸残基，但顺序不同，二者 Staphylococcus aureus，MRSA）ATCC 43300、大肠杆菌
分别组装形成了β-折叠结构和无规球状结构，结构的不 （Escherichia coli）ATCC 25922、人 皮 肤 成 纤 维 细 胞
同可影响其表观电位和抗菌效果。本研究采用标准固 （HFF-1）均购自上海雅吉生物科技有限公司，批号分别
相合成法合成一组同分异构的二茂铁（Ferrocene，Fc）偶 为HDLR908、HBJT086、GEYI879。
联自组装多肽，从其二级结构表征、ROS生成效率、抗菌 2 方法
活性以及生物相容性等方面，探究调节官能团位置异构 2.1 Fc偶联自组装多肽的制备、纯化及分子量测定
对多肽自组装行为和生物活性的影响，以期为进一步开 采用标准固相合成法 进行合成。用 5 mL 二氯甲
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发新型协同抗菌纳米材料提供思路和策略。 烷和 5 mL DMF 膨胀 Rink-酰胺树脂（0.5 mmol）30 min，
1 材料 DMF洗涤3遍后，加入4-甲基-哌啶/DMF（1∶4，V/V）溶液
1.1 主要仪器 15 mL 反应 15 min，再用 DMF 洗涤 3 遍，重复上述操
本研究所用主要仪器有 LC-20AR 型半制备型液相 作；然后加入树脂 4 倍量的氨基酸（或 Fc、C8）/苯并三
色谱仪（日本 Shimadzu 公司），6230 型液相色谱-飞行时 氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐/三异丙基硅烷
间质谱联用（TOF-MS）仪（美国 Agilent 公司），UV-2700 （2∶2∶5，m/m/m）溶液，加入 DMF 8 mL，反应至少 2 h，循
型紫外可见分光光度计、NICOLET iS5型傅里叶红外光 环以上操作，逐步延长设计的肽序列；最后用8 mL DMF
谱（Fourier transform infrared spectrum，FTIR）仪、Varios‐ 洗涤树脂 3 次，用 8 mL 二氯甲烷洗涤树脂 5 次，接着加
kan Flash-602 型多功能酶标仪[赛默飞世尔科技（中国） 入10 mL三氟乙酸/三异丙基硅烷/水（92.5∶5∶2.5，V/V/V）
有限公司]，FL-6500 型荧光光谱仪[珀金埃尔默仪器（上 溶液，反应 3 h。通氮气将该溶液挥发至 2～3 mL，乙醚
海）有限公司]，Zetasizer Nano ZS 型纳米粒度仪及 Zeta 沉淀得到Fc-K（C8 ）FFHK、C8-K（Fc）FFHK、C8-K（C8 ）FFHK
电位分析仪（英国 Malvern 公司），J-1500 型圆二色光谱 的粗产物。
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（circular dichroism spectrum，CD）仪[佳司科（上海）贸易 采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法 对上述3种

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