Page 24 - 《中国药房》2023年18期
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为了防止模型组大鼠死亡，将建模成功且体重排名前 肛门皮毛边缘取15 mm长的直肠，置于0.5 mL甲酰胺溶
10 位的大鼠分为模型组，剩余大鼠随机分为中药阳性 液中，于 45 ℃恒温水浴 72 h 后称重，并使用酶标仪在
[8]
对照组（马应龙麝香痔疮膏 1 g/kg） 、西药阳性对照组 620 nm 波长处测定样本浸泡的甲酰胺溶液的 OD 值。
（复方角菜酸酯乳膏，按照人鼠体表面积换算药物剂量 根据伊文思蓝回归方程计算各样本中所含伊文思蓝的
[9]
为 1 g/kg） 和加味三黄膏低、中、高剂量组（185、370、 质量，再按下式计算各组大鼠直肠血管通透性：血管通
740 mg/kg），每组10只。各给药组大鼠在直肠接触巴豆 透性＝伊文思蓝质量（µg）/直肠质量（g）。
油6 h时，在肛门内2 cm处涂抹相应药物1次，4 h后第2 2.4 统计学方法
次涂抹相应药物。 采用SPSS 13.0软件进行统计分析。数据用x±s表
2.3.2 大鼠血清中炎症因子含量和直肠肛门肿胀率的
示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用 Ridit
检测
检验。检验水准α＝0.05。
取大鼠 70 只，按“2.3.1”项下方法分组、建模、给药。
3 结果
第2次给药后2 h取血，根据试剂盒说明书操作，使用酶
3.1 大鼠肛门溃疡实验结果
标仪检测各组大鼠血清中 IL-2、IL-4、TNF-α 含量；然后
3.1.1 大鼠体重变化
处死大鼠，从肛门起取向上 15 mm 长的直肠，即从肛门
与空白组同时间点比较，模型组大鼠从给药第 6 天
皮毛边缘起剪切，修剪肛门皮毛及直肠周围结缔组织后
起体重增加量均显著降低（P＜0.01）；与模型组同时间
称重，即得直肠湿重；将取出的直肠置于80 ℃恒温干燥
箱中干燥16 h，再次称重，即得直肠干重，按下式计算大 点比较，各给药组大鼠体重增加量整体呈现升高趋势，
鼠直肠肛门肿胀率：直肠肛门肿胀率＝（直肠湿重－直 其中，加味三黄膏低剂量组从给药第13天起，加味三黄
肠干重）/直肠湿重×100%。 膏中、高剂量组从给药第9天起，中、西药阳性对照组从
2.3.3 大鼠直肠组织病理形态观察 给药第 15 天起体重增加量升高趋势显著（P＜0.05 或
另取大鼠 70 只，按“2.3.1”项下方法分组、建模、给 P＜0.01）。结果见图1。
药。第2次给药后2 h处死大鼠，从肛门起取向上15 mm 70 空白组
模型组
长的直肠，剔除直肠周围结缔组织，用生理盐水漂洗、滤 60 加味三黄膏低剂量组
50 加味三黄膏中剂量组
纸吸干水分。将大鼠直肠组织固定于多聚甲醛中，用 40 加味三黄膏高剂量组
中药阳性对照组
HE 染色，在光学显微镜下观察各组大鼠直肠组织病理 体重增加量/g 30 西药阳性对照组
形态变化。 20
2.3.4 大鼠直肠组织中TRPV1和P物质表达的检测 10
0
另取大鼠 70 只，按“2.3.1”项下方法分组、建模、给
－10 给药6 d 给药 9 d 给药11 d 给药13 d 给药15 d
药，按“2.3.3”项下方法取直肠组织，并固定于多聚甲醛 a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组
中，然后切片、脱蜡、水化、热修复处理，并用磷酸盐缓冲 比较，P＜0.01。
溶液（PBS）清洗后，加入兔 TRPV1 抗体、兔 P 物质抗体 图1 加味三黄膏对肛门溃疡模型大鼠体重的影响（x±
（稀释比例均为1∶200），孵育1 h，再用PBS清洗，加入二 s，n＝10）
抗（稀释比例为 1∶500），孵育 20 min，最后用 PBS 清洗，
3.1.2 大鼠肛门溃疡面积变化
加入二甲基联苯胺染色及苏木精复染，经乙醇脱水至透
与空白组比较，模型组不同时间点大鼠的肛门溃疡
明后，用中性树胶封片，即得。用显微镜观察并采集图
面积均显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组不
片，每张切片各选 5 个不同视野，采用 Image J 软件分析
同时间点大鼠的肛门溃疡面积均减小（除加味三黄膏高
阳 性 表 达（棕 黄 色）的 平 均 光 密 度（optical density，
剂量组0 d外），其中加味三黄膏各剂量组大鼠从给药第
OD）值。
2.3.5 大鼠直肠血管通透性的检测 6 天起、西药阳性对照组大鼠从给药第 13 天起、中药阳
性对照组大鼠从给药第 15 天起肛门溃疡面积均显著减
取 250 mg 伊文思蓝，置于 10 mL 容量瓶中，用甲酰
胺完全溶解均匀，得伊文思蓝标准品溶液。取上述伊文 小（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表1。
3.1.3 大鼠肛门溃疡等级变化
思蓝标准品溶液，用甲酰胺稀释至不同浓度，使用酶标
仪于 620 nm 波长处测定 OD 值。以浓度为横坐标（x）、 与模型组比较，各给药组大鼠肛门溃疡等级均降
平均OD值为纵坐标（y）绘制标准曲线，求得伊文思蓝的 低，其中加味三黄膏各剂量组改善效果优于西药阳性对
2
回归方程y＝0.125 5x+0.033 4（R ＝0.999 7）。 照组和中药阳性对照组。结果见表2。
另取大鼠 70 只，按“2.3.1”项下方法分组、建模、给 3.2 大鼠直肠肿胀实验结果
药。在直肠水肿达到肿胀峰值前30 min（即直肠接触巴 3.2.1 大鼠血清中IL-2、IL-4和TNF-α含量变化
豆油后5.5 h），按20 mg/kg剂量尾静脉注射含1%伊文思 与空白组比较，模型组大鼠血清中 IL-2、IL-4 和
蓝的生理盐水，4.5 h 后（即第 2 次给药后）处死大鼠，于 TNF-α 含量均显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，西
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