Page 19 - 《中国药房》2023年18期
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2.3.2 AGS细胞中糖代谢的检测                                 3.2 阿托伐他汀对AGS细胞糖代谢的影响
              按“2.2”项下正式实验分组、给药，干预24 h后，收集                       与对照组相比，阿托伐他汀组与阳性对照组细胞中
          细胞，反复冻融进行裂解，取裂解液于 4 ℃下 12 000×g                    葡萄糖和乳酸含量均显著降低（P＜0.05）；与阿托伐他
          离心 10 min，收集上清液，分别按照葡萄糖和乳酸含量                       汀组相比，抑制剂组细胞中葡萄糖和乳酸含量均显著降
          试剂盒说明书进行操作，测定细胞中葡萄糖和乳酸的                            低（P＜0.05），激活剂组细胞中葡萄糖和乳酸含量均显
                                                             著升高（P＜0.05）。结果见图1。
          含量。
          2.3.3 AGS细胞的增殖能力检测                                           40
              采用 EdU 法进行检测。按“2.2”项下正式实验分
          组、给药，干预 24 h 后，收集细胞，按照 EdU 细胞增殖检                            （ mmol/L ）  30  a          b
          测试剂盒说明书用 EdU 标记细胞后，弃培养液，用甲醛                                  20              a    b
          固定15 min，用含3%BSA的磷酸盐缓冲液（下同）洗涤3                              葡萄糖含量/
          次；用 Triton X-100 通透 10 min，再洗涤 3 次；加入 200                    10
          μL Click 反应液，室温避光孵育 30 min，再洗涤 3 次；每                         0
          孔加入 0.5 mL Hoechst，反应 10 min，再洗涤 3 次，装片。                         对照组  阿托伐  阳性对   抑制   激活
                                                                                                剂组
                                                                                           剂组
                                                                                      照组
                                                                                他汀组
          用荧光显微镜观察并拍照，使用 Image J 1.8.1 软件处理                                      A.葡萄糖含量
                                                                       0.3
          图片，以EdU阳性染色细胞占总细胞的比例表示细胞增                                                              b
          殖率。                                                          0.2
          2.3.4 AGS 细胞自噬及 PI3K/Akt 信号通路相关蛋白表                          （ mmol/L ）  a    a
          达的检测                                                        乳酸含量/  0.1            b
              采用蛋白免疫印迹法进行检测。按“2.2”项下正式
          实验分组、给药，干预24 h后，收集细胞，加入RIPA裂解
                                                                       0
          液进行裂解，离心；取上清液，提取蛋白，定量后上样，以                                       对照组  阿托伐  阳性对   抑制   激活
                                                                                他汀组   照组   剂组   剂组
          十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜；加入 5%                                             B.乳糖含量
          脱脂牛奶封闭 2 h 后，加入一抗（LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、PI3K、                     a：与对照组相比，P＜0.05；b：与阿托伐他汀组相比，P＜0.05。
          Akt、p-PI3K、p-Akt、β-actin 稀释比例分别为 1∶ 2 000、           图1 阿托伐他汀对AGS细胞糖代谢的影响（n＝3）
          1∶2 000、1∶5 000、1∶5 000、1∶1 000、1∶5 000、1∶10 000），
                                                             3.3 阿托伐他汀对AGS细胞增殖能力的影响
          4 ℃孵育过夜；用TBST洗涤3次后，加入二抗（稀释比例                           与对照组相比，阿托伐他汀组与阳性对照组细胞增
          为1∶5 000），孵育2 h后弃液，用TBST洗涤3次，加显影                   殖率均显著降低（P＜0.05）；与阿托伐他汀组相比，抑制
          液，用凝胶成像系统拍照。用 Image J 1.8.1 软件进行分                  剂组细胞增殖率显著降低（P＜0.05），激活剂组细胞增
          析，以目标蛋白与内参（β-actin）的灰度值比值为目标蛋                      殖率显著升高（P＜0.05）。结果见图2、图3。
          白的表达水平，并以 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值评价               3.4 阿托伐他汀对 AGS 细胞中 LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表
          PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平。试验重复3次。                           达的影响
          2.4 统计学分析                                              与对照组相比，阿托伐他汀组和阳性对照组细胞中
              采用 SPSS 26.0 软件进行统计分析。计量资料以                    LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）；与
          x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析；符合正态                         阿托伐他汀组相比，抑制剂组细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白
                                                             表达水平均显著升高（P＜0.05），激活剂组细胞中 LC3
          分布且方差齐时，组间两两比较采用 Dunnett’s t 检验；
                                                             Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结果
          不 符 合 正 态 分 布 时 ，采 用 秩 和 检 验 。 检 验 水 准
                                                             见图4。
          α＝0.05。
                                                             3.5 阿托伐他汀对 AGS 细胞中 PI3K/Akt 信号通路相
          3 结果
                                                             关蛋白表达的影响
          3.1 阿托伐他汀对AGS细胞活力的影响
                                                                 与对照组相比，阿托伐他汀组和阳性对照组细胞中
              对照组和低、中、高浓度实验组细胞活力分别为                          p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值均显著降低（P＜0.05）；与
         （100.00±4.91）% 、（89.66±5.01）% 、（50.16±4.82）% 、      阿托伐他汀组相比，抑制剂组细胞中 p-PI3K/PI3K、
         （36.41±5.35）%（n＝3）。与对照组相比，低浓度实验组                    p-Akt/Akt 比值均显著降低（P＜0.05），激活剂组细胞中
          细胞活力无明显变化，中、高浓度实验组细胞活力均显                           p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值均显著升高（P＜0.05）。结
          著降低（P＜0.05）。                                       果见图5。


          中国药房  2023年第34卷第18期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 18    · 2189 ·
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