Page 23 - 《中国药房》2023年17期

2.4 肺组织病理形态学观察 肺泡轻微水肿伴大量炎症细胞浸润，且以淋巴细胞和中
取右肺上叶组织用 5% 多聚甲醛固定、梯度乙醇脱 性粒细胞为主，血管周围间质性水肿，说明 ALI 模型复
水、常规石蜡包埋、切片（厚度 4 μm）后，以苏木素-伊红 制成功；与MOD组比较，各给药组大鼠的肺组织病变程
（hematoxylin-eosin，HE）染色，然后在光学显微镜下对肺 度均明显减轻，具体表现为肺组织炎症细胞浸润减少、
组织进行病理形态学观察。 肺泡隔增厚和肺泡水肿情况有所改善。结果见图1。
2.5 肺组织湿/干重比计算
取右肺下叶用生理盐水清洗后吸干水分，称重，得
湿重。然后将肺组织置于干燥箱中，70 ℃干燥 48 h，称
重，得干重。计算肺组织湿/干重比，即肺组织湿重/肺组
织干重×100％。
2.6 BALF中炎症因子水平检测
取“2.3”项下 BALF，采用 ELISA 法检测大鼠 BALF A. CON组 B. MOD组
中TNF-α、IL-6和IL-1β水平，具体操作根据相应试剂盒
说明书进行。
2.7 肠道菌群检测
以CON组、MOD组和药效最优的SGD剂量组大鼠
的粪便为检测样本（每组随机选择6只大鼠的样本进行
检测），委托杭州联川生物技术股份有限公司进行 16S
rRNA 测序和生物信息学分析。对粪便样本进行 DNA C. DEX组 D. SGD-L组
提取后，采用引物341F（5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-
3′）和 805R（5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′）对
可变区（V3~V4）扩增，之后在lllumina MiSeq平台测序，
按照相似度 97% 聚类，获得操作分类单元（operational
taxonomic units，OTUs）。对所获OTUs进行分类学注释
并生成不同分类水平下的物种丰度，利用Mothur软件计
E. SGD-M组 F. SGD-H组
算样品的 Observed-species、Shannon、Simpson、Chao1 和
图1 各组大鼠肺组织病理形态学观察的显微图（HE染
Goods-coverage指数，分析单个样品内部的物种多样性，
色，×200）
即Alpha多样性；基于weighted UniFrac算法中的主坐标
分析（principal co-ordinates analysis，PCoA）和非度量多 3.2 大鼠肺组织湿/干重比计算结果
维 标 度 分 析（non-metric multidimensional scaling， 与CON组比较，MOD组大鼠肺组织湿/干重比显著
NMDS）比较不同样品在物种多样性方面的相似程度， 升高（P＜0.01）；与 MOD 组比较，各给药组大鼠的肺组
即 Beta 多样性；最后，通过线性判别分析进行效应大小 织湿/干重比均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。结果
[linear discriminant analysis（LDA） effect size，LEfSe]分 见表1。
析并寻找差异菌群（以LDA score log10＞4为标准）。 表1 各组大肺组织湿/干重比和 BALF 中 IL-1β、IL-6、
2.8 统计学方法 TNF-α水平测定结果（x±s，n＝10）
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。符合正 组别 肺组织湿/干重比/% IL-1β/（pg/mL） IL-6/（pg/mL） TNF-α/（pg/mL）
CON组 6.80±0.59 12.62±0.77 33.41±9.58 22.19±5.27
态分布的计量资料用x±s表示，多组间比较采用单因素 MOD组 8.23±0.62 a 33.07±3.12 a 137.33±12.39 a 90.27±6.80 a
方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，检验水准α＝ DEX组 7.31±0.64 b 23.34±2.29 b 69.03±7.89 b 42.66±5.03 b
0.05。为了确定在 ALI 进展中起作用的关键菌群，将 SGD-L组 7.40±0.68 b 22.19±3.63 b 86.49±9.67 b 54.04±5.65 b
SGD-M组 7.53±0.63 c 24.57±3.17 b 99.19±12.49 b 59.44±16.67 b
MOD 组和 SGD-L 组的差异菌属与炎症因子进行 Pear‐
SGD-H组 7.58±0.60 c 28.22±3.65 b 104.24±14.12 b 67.50±10.50 b
son相关性分析。 a：与CON组比较，P＜0.01；b：与MOD比较，P＜0.01；c：与MOD组
3 结果 比较，P＜0.05。
3.1 大鼠肺组织病理形态学变化观察结果 3.3 大鼠BALF中炎症因子水平测定结果
CON 组大鼠肺组织结构正常，未见明显水肿、炎症 与 CON 组比较，MOD 组大鼠 BALF 中 IL-1β、IL-6、
细胞浸润或纤维结缔组织增生，肺泡上皮细胞形态较为 TNF-α水平显著升高（P＜0.01）。与MOD组比较，各给
正常，未见明显变性、坏死，间质未见明显炎症细胞浸润 药组大鼠 BALF 中上述炎症因子水平均显著降低（P＜
及纤维组织增生；MOD组大鼠肺组织可见肺泡隔增厚， 0.01）。结果见表1。

中国药房 2023年第34卷第17期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 · 2065 ·