Page 25 - 《中国药房》2023年16期

CA组细胞加入RBC裂解液和相应浓度的药液；培养72 20
a a 假手术组
h后，收集各组细胞，按“2.2.6”项下蛋白质印迹法检测各 a 模型组
组细胞中TLR4、TNF-α、iNOS、IL-1β蛋白的相对表达水 15 15 mg/kg CA组
30 mg/kg CA组
平。上述实验重复4次。 b 60 mg/kg CA组
2.3.2 原代神经元与原代小胶质细胞共培养中神经元 mNSS评分/分 10 b b 120 mg/kg CA组
凋亡程度的检测 b b b b b b
5
从15～18 d孕龄的C57BL/6孕小鼠中取出胚胎，分
离出胚胎鼠的大脑皮层。将皮层组织在含有 20%FBS
0
的DMEM高糖培养基中剪碎，用含有100 U/mL DNA酶 24 h 48 h 72 h
Ⅰ的ACCUTASE细胞消化液消化并重悬后离心、过滤； a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
图1 CA对小鼠脑出血后mNSS评分的影响（x±s，n＝8）
用含有2%B27和1%谷氨酰胺的Neurobasal培养基重悬
后，将所得神经元接种到聚-D-赖氨酸包被的 12 孔板
中。原代小胶质细胞提取和培养同“2.3.1”项下。使用
Transwell小室共培养原代神经元和原代小胶质细胞：在
Transwell上室接种20 000个原代小胶质细胞，下室接种
10 000个原代神经元。按“2.3.1”项下分组和给药，培养
72 h后弃去培养基，细胞用4%多聚甲醛固定30 min后，
用 PBS 稀释的 0.3%Triton X-100 通透 20 min；用 PBS 洗
涤后，用含 5%BSA 的 PBS 封闭 1 h；加入 NeuN 一抗（稀
释比例为 1∶1 000），于 4 ℃下孵育过夜；加入 Alexa
Fluor 555标记的IgG二抗（稀释比例为1∶1 000），继续孵
育 2 h；用 PBS 洗涤 3 次后，滴加 DAPI 避光孵育 5 min，
PBS 洗涤后封片并使用显微镜观察。随机选取每张荧
光染色图片5个不重叠的高倍（×200）视野拍摄，计算每
个视野中被染成红色的细胞数与被染成蓝色的有核细
胞数的比值，其平均值即为原代神经元的存活率。上述 假手术组 模型组 30 mg/kg CA组 60 mg/kg CA组
实验重复3次。 图2 各组小鼠代表性脑切片图
2.4 统计学方法 与假手术组小鼠的脑含水量[（78.22±1.66）%]比
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资 较，模型组小鼠的脑含水量[（85.22±2.85）%]显著升高
料均以 x±s 表示，多组间比较采用 One-way ANOVA 分 （P＜0.05）；与模型组比较，30、60 mg/kg CA组小鼠的脑
析 ，进 一 步 两 两 比 较 采 用 LSD-t 检 验 。 检 验 水 准
含水量[分别为（81.12±2.63）%、（80.26±2.59）%]均显
α＝0.05。
著降低（P＜0.05）。
3 结果
3.1.3 CA对小鼠脑组织中Iba1蛋白表达的影响
3.1 体内动物实验结果
与假手术组小鼠脑组织中 Iba1 蛋白的表达阳性率
3.1.1 CA对小鼠mNSS评分的影响
[ （4.84±0.78）%]比较，模型组小鼠脑组织中Iba1蛋白呈
手术 24、48、72 h 后，15 mg/kg CA 组小鼠的 mNSS
聚集现象，其表达阳性率[（42.18±2.32）%]显著升高
评分与模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；
（P＜0.05）；与模型组比较，30、60 mg/kg CA组小鼠脑组
30、60、120 mg/kg CA 组小鼠的 mNSS 评分均较模型组
织中Iba1蛋白有所减少，其表达阳性率[分别为（17.38±
显著降低（P＜0.05），结果见图1。120 mg/kg CA组小鼠
1.86）%、（9.27±1.61）%]均显著降低（P＜0.05）。结果
的mNSS评分与60 mg/kg CA组差异较小，因此选取30、
见图3。
60 mg/kg作为CA的干预剂量进行后续实验。
3.1.2 CA对小鼠脑出血体积和脑含水量的影响 3.1.4 CA 对小鼠脑组织中 TLR4 及其下游炎症因子表
假手术组小鼠无明显的脑出血区域；与假手术组比 达的影响
较，模型组小鼠可见脑出血现象，其脑出血体积为 与假手术组比较，模型组小鼠脑组织中 TLR4 及其
3
（7.82±0.52）mm ；与模型组比较，30、60 mg/kg CA 组小 下游炎症因子TNF-α、iNOS、IL-1β蛋白的相对表达水平
鼠的脑出血区域有所缩小，其脑出血体积[分别为 均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，30、60 mg/kg CA
（4.81±0.26）mm 、（2.33±0.19）mm ]均显著降低（P＜ 组小鼠脑组织中上述蛋白的相对表达水平均显著降低
3
3
0.05）。结果见图2。 （P＜0.05）。结果见图4。

中国药房 2023年第34卷第16期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 16 · 1939 ·