Page 64 - 《中国药房》2023年15期

siPPARα 组（细 胞 转 染 PPARα siRNA 并 用 10 ng/mL 120
TNF-α+β-谷甾醇处理），每组设 3 个复孔。准备无菌离
90 a
心管，加入 47.5 μL 无血清 Opti-MEM I 培养基和 2.5 μL a
的 X-tremeGENE siRNA 转染试剂混合备用；再将 40 细胞活力/% 60
μmol/L 的 siNC、siPPARα 分 别 与 50 μL 无 血 清 Opti- 30
MEM I 培养基混合，混匀上述两管液体后于室温孵育
0
15 min，旋转滴加入各组对应的孔中，37 ℃孵育 48 h 后 0 5 10 20 40
β-谷甾醇浓度/（μmol/L）
提取细胞总蛋白，按“2.2.8”项下方法进行 Western blot
a：与空白组相比，P＜0.05。
检测，验证 PPARα 的敲低效率。取转染后的各组细胞， 图2 β-谷甾醇对MH7A细胞活力的影响
按“2.2.3”项下方法检测细胞增殖能力，按“2.2.4”项下方
3.4 β-谷甾醇对MH7A细胞增殖的影响
法检测细胞迁移能力，按“2.2.5”项下方法检测细胞侵袭
能力，按“2.2.6”项下方法检测IL-1β和IL-6的水平。 与对照组相比，模型组细胞活力上升了 120%（P＜
2.4 统计学方法 0.05）；经 β-谷甾醇处理后，细胞活力下降了 80%（P＜
采用 GraphPad Prism 8 软件对数据进行统计学分 0.05）。荧光图显示，与对照组相比，模型组发生增殖的
析。实验数据以x±s表示。单因素方差分析组间差异， 细胞数目（38 个）显著增加（P＜0.05）；经 β-谷甾醇处理
组间两两比较用 Bonferroni 法进行分析。检验水准 后，发生增殖的细胞数目（22 个）显著减少（P＜0.05）。
α＝0.05。 结果见图3。
3 结果
3.1 β-谷甾醇治疗RA的靶点预测结果 DAPI
通过不同数据库共筛选得到103个β-谷甾醇的作用
靶点，得到385个RA的治疗靶点，两者取交集后得到15
个β-谷甾醇治疗RA的潜在靶点。
3.2 靶点蛋白互作网络的拓扑分析结果 EdU
利用 String 平台及 Cytoscape 软件，得到 15 个靶点
对应蛋白的靶点蛋白互作网络拓扑分析图。结果如图1
对照组 模型组 β-谷甾醇组
所示，其中圆形节点代表靶蛋白，节点越大、橙色越深， 图3 β-谷甾醇对MH7A细胞增殖的影响（×100）
表示度值越高，在互作网络中作用越关键。该图表明
3.5 β-谷甾醇对MH7A细胞迁移的影响
PPARα是β-谷甾醇治疗RA的最关键靶点。
与 对 照 组 相 比 ，模 型 组 细 胞 迁 移 率 [（71.55±
2.78）%]显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，β-谷甾醇组
细胞迁移率[（58.73±0.84）%]显著降低（P＜0.05）。结
果见图4。

0 h

图1 靶点蛋白互作网络拓扑分析图
24 h
3.3 β-谷甾醇对MH7A细胞活力的影响
与空白组相比，5、10 μmol/L 的 β-谷甾醇处理对
MH7A 的细胞活力无明显影响，β-谷甾醇浓度≥20 对照组 模型组 β-谷甾醇组
图4 β-谷甾醇对MH7A细胞迁移的影响（×100）
μmol/L 时，细胞活力显著下降（P＜0.05）。细胞活力大
于 80% 的药物浓度为无毒剂量，β-谷甾醇 5、10 μmol/L 3.6 β-谷甾醇对MH7A细胞侵袭的影响
组虽然满足细胞活力大于 80%，但与空白组相比，细胞 与对照组相比，模型组细胞侵袭数（220 个）显著增
活力无显著差异，因此选择 20 μmol/L 作为后续实验浓 加（P＜0.05）；与模型组相比，β-谷甾醇组细胞侵袭数
度。结果见图2。 （160个）显著减少（P＜0.05）。结果见图5。

· 1850 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 中国药房 2023年第34卷第15期