Page 62 - 《中国药房》2023年15期
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cell  invasion  increased  significantly （P＜0.05），  and  the  levels  of  IL-1β  and  IL-6  also  increased  significantly （P＜0.05）.
          CONCLUSIONS  β-sitosterol  could  effectively  inhibit  the  proliferation，  migration，  invasion  and  secretion  of  inflammatory  factors
          in MH7A cells， the mechanism of which may be associated with activating PPARα pathway.
          KEYWORDS     β-sitosterol；  rheumatoid  arthritis；  peroxisome  proliferator-activated  receptor  α；  proliferation；  migration；  invasion；
          inflammatory factor



              类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常            ELISA 试剂盒（批号 SEKH-0013）均购自北京索莱宝科
          见的慢性系统性自身免疫疾病，以侵蚀性关节炎为主，                            技有限公司；胎牛血清（批号 2094466RP）、DMEM 培养
          严重时可导致关节损伤和不可逆的残疾。RA的全球患                            基（批号8122250）、Opti-MEM I培养基（批号31985070）
          病率为0.5%～1%，以女性多见且有逐年上升的趋势，已                         均购自美国 Gibco 公司；Cell-Light  EdU Apollo567 In
                                                                                            TM
          严重影响患者的身心健康及生活质量 。临床治疗 RA                           Vitro Kit（批号C10310-1）购自广州市锐博生物技术有限
                                           [1]
          的药物有传统抗风湿药物、非甾体类药物及生物制剂                             公司；X-tremeGENE siRNA转染试剂（批号4476093001）
          等，虽能有效缓解临床症状，但存在毒副作用大或成本                            购自瑞士 Roche 公司；逆转录试剂盒（批号 D7168M）购
                  [2]
          高的问题 。RA在中医理论中属“痹症”范畴，“痹”有闭                         自上海碧云天生物技术有限公司；小鼠过氧化物酶体增
          塞不通之意，病因主要是人体正气不足从而使风、湿、                            殖物激活受体 α（peroxisome proliferator-activated recep‐
                         [3]
          寒、暑等外邪侵入 。大量研究表明，中医治疗 RA 具有                         tor α，PPARα）单克隆抗体（批号MA1-822）、阴性对照小
          疗效好、安全性高的优势，这提示中药治疗RA具有广阔                           干扰RNA（negative control small interfering RNA，siNC）、
          前景。                                                 PPARα 小 干 扰 RNA（PPARα  small  interfering  RNA，
              近年来，越来越多的研究表明植物甾醇不仅具有抗                          siPPARα；靶序列为 5′-CAATGTTTATAATCCTATAAG-
          炎活性，还对先天性或获得性免疫系统具有调节作                              3′）均购自美国Thermo Fisher Scientific公司；小鼠β-actin
          用 [4―5] 。植物甾醇种类繁多，其中β-谷甾醇是中药中含量                     抗体（批号 ab179467）、辣根过氧化物酶（horseradish
          高且分布广泛的一种。已有研究表明，β-谷甾醇具有与                           peroxidase，HRP）标 记 的 羊 抗 鼠 IgG 抗 体（ 批 号
                                       [4]
          地塞米松相似的药代动力学特性 ，可预防肥胖相关的                            ab205719）均购自英国Abacm公司。
                  [6]
          慢性炎症 ，还对前列腺增生引发的前列腺炎具有治疗                            1.3 细胞株
              [7]
          作用 ，这些研究均表明β-谷甾醇具有强大的抗炎活性；                              人RA滑膜成纤维细胞MH7A购自北纳创联生物技
          β-谷甾醇还可调节机体免疫系统活性，如选择性地抑制                           术有限公司，货号为BNCC337864。
          2 型辅助性 T 细胞活性并促进其向 1 型辅助性 T 细胞转                     2 方法
                              [8]
          变，增加免疫活性物质 。以上的研究提示 β-谷甾醇或                          2.1 网络药理学分析
          可用于治疗 RA，但 β-谷甾醇对 RA 的具体作用还未可                       2.1.1 β-谷甾醇治疗RA的靶点预测
          知。因此本文拟探索β-谷甾醇对人RA滑膜成纤维细胞                               利用 SwissTargetPrediction 平台（http：//www.swiss-
          MH7A功能的影响及其机制，为临床应用β-谷甾醇治疗                          targetprediction. ch/）和 TCMSP 数 据 库（http：//tcmspw.
          RA提供理论支持。                                           com/tcmsp.php）预测并收集 β-谷甾醇的作用靶点；使用
          1 材料                                                TTD（http：//db.idrblab.net/ttd/）、OMIM（https：//www.
          1.1 主要仪器                                            omim.org/）和pharmGKB（https：//www.pharmgkb.org/）数
              本研究所用的主要仪器有 LS-C0150 型 CO2培养箱                   据 库 收 集 RA 的 相 关 靶 点 。 利 用 VENNY2.1.0 平 台
         （美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、SW-CJ-1F 型超净       （https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html），将
          工作台（浙江苏净净化设备有限公司）、BX51 型荧光显                         β-谷甾醇作用靶点和 RA 相关靶点导入取交集，交集靶
          微镜（日本 Olympus 公司）、iMark 型酶标仪（美国 Bio-                点即为β-谷甾醇治疗RA的潜在靶点。
          Rad 公司）、MyGOPRO 型定量实时聚合酶链式反应                        2.1.2 靶点蛋白互作网络的拓扑分析
         （quantitative  real  time  polymerase  chain  reaction，qRT-  利用 String 平台（https：//cn.string-db.org/）构建交集
          PCR）仪（英国 IT-IS 公司）、JY300HC 型电泳仪（北京君                 靶点蛋白的互作网络，以TSV格式导入Cytoscape软件，
          意东方电泳设备有限公司）。                                       依据节点的度值、中心性进行网络拓扑分析。
          1.2 主要药品与试剂                                         2.2 β-谷甾醇对MH7A细胞功能的影响
              β-谷甾醇标准品（批号SS8580，纯度≥98%）、CCK-8                 2.2.1 细胞培养
          试剂盒（批号 CA1210）、白细胞介素 1β（interleukin-1β，                 使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基培养 MH7A
          IL-1β）酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosor‐             细胞，于 37 ℃、5%CO2 孵箱中培养，当细胞融合度达
          bent  assay，ELISA）试 剂 盒（批 号 SEKH-0002）和 IL-6        80%时进行传代培养。


          · 1848 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 15                            中国药房  2023年第34卷第15期
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