Page 33 - 《中国药房》2023年15期

表2 日内、日间精密度和准确度考察结果 离子模式下，所有待测成分的离子化程度更高，且干扰
日内（n＝6） 日间（n＝18） 较少，故选用负离子模式。笔者也对多种品牌、规格的
理论质量浓度/
成分 实测质量浓度 精密度 准确度 实测质量浓度 精密度 准确度 TM
（ng/mL） 色谱柱进行了考察，包括 DIKMA Diamonsil C18 （4.6
（x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/% （x±s）/（ng/mL） RSD/% RE/%
芍药苷 1.12 1.20±0.14 11.83 7.14 1.19±0.05 4.60 6.25 mm×150 mm，5 μm）、COSMOSIL Packed Column 5C18-
3.36 3.27±0.19 5.68 －2.68 3.26±0.25 7.64 －2.98 PAQ（4.6 mm× 250 mm，5 μm）和 Agilent ZORBAX SB-
56.00 54.89±1.78 3.25 －1.98 53.89±3.70 6.87 －3.77
84.00 85.65±3.37 3.93 1.96 86.65±4.20 4.85 3.15 C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），同时也考察了不同流动相
橙皮苷 2.12 2.15±0.28 13.14 1.42 2.16±0.31 14.22 1.89 系统（甲醇-水、甲醇-乙腈-水、乙腈-水）。由于待测成分
6.36 6.85±0.58 8.51 7.70 6.65±0.46 6.98 4.56
212.00 215.22±4.54 2.11 1.52 214.22±2.98 1.39 1.05 多具有弱酸性，故笔者尝试在水相中加入不同浓度的甲
318.00 315.74±4.26 1.35 －0.71 309.74±2.69 0.87 －2.60 酸、乙酸等改性剂，用以改善色谱分离情况。结果表明，
柚皮素 0.36 0.37±0.05 14.55 2.78 0.37±0.05 14.57 2.78 加入甲酸效果最好，但由于在负离子模式下，甲酸对离
1.08 1.05±0.12 11.36 －2.78 1.04±0.10 10.06 －3.70
180.60 181.30±11.29 6.23 0.39 185.30±10.53 5.68 2.60 子化具有抑制作用，故选用低浓度甲酸。
270.98 276.20±9.28 3.36 1.93 280.20±6.98 2.49 3.40 3.2 血浆样品预处理方法选择
芒柄花素 1.23 1.34±0.08 6.31 8.94 1.32±0.11 8.25 7.32
3.69 3.58±0.20 5.59 －2.98 3.38±0.16 4.87 －8.40 血浆样品前处理常用方式主要有液液萃取法与蛋
61.50 62.10±0.71 1.14 0.98 63.10±0.55 0.87 2.60 白沉淀法。由于待测成分的理化性质相差较大，很难用
92.25 95.28±0.91 0.96 3.28 95.28±1.20 1.26 3.28 同一有机溶剂进行萃取，故本研究采用蛋白沉淀法。笔
甘草次酸 1.06 1.14±0.15 12.76 7.55 1.09±0.07 6.49 2.83
3.16 3.25±0.34 10.54 2.82 3.29±0.23 6.89 4.11 者对比常见的蛋白质沉淀剂甲醇、乙腈、乙醇和丙酮后
105.50 106.77±9.25 8.66 1.20 107.56±7.05 6.55 1.95 发现，乙腈用作沉淀剂，能够有效地提高5种待测成分的
158.25 158.63±4.98 3.14 0.24 159.63±7.28 4.56 0.87
检测灵敏度、回收率，降低基质效应的干扰等，所以本研
表3 提取回收率和基质效应（n＝6） 究选用乙腈作为蛋白质沉淀剂，并采用氮气流吹干、溶
理论质量浓度/ 提取回收率 基质因子
成分 剂复溶的方式进一步提高方法的灵敏度；且为消除分析
（ng/mL） 均值（x±s）/% RSD/% 均值（x±s）/% RSD/%
芍药苷 1.12 88.05±3.23 3.67 88.39±3.46 3.92 时产生的溶剂效应，笔者在复溶时采用 80% 甲醇为
11.20 77.44±1.10 1.42 84.06±5.67 6.75 溶剂。
112.00 80.21±7.67 9.56 100.92±0.28 0.28
橙皮苷 2.12 73.54±9.52 12.95 89.19±4.80 5.38 3.3 测定指标的选择
21.20 72.76±1.70 2.33 84.29±0.56 0.66 齿痛消炎灵颗粒含有 10 味中药，化学成分复杂，其
424.00 80.47±2.82 3.50 99.36±0.74 0.74 药效物质仍不明确。但是，药效物质只有进入体内才能
柚皮素 0.36 83.55±12.32 14.74 96.74±12.50 12.92
[4]
36.13 92.47±6.24 6.75 71.57±7.39 10.32 发挥药效，因此，在前期化学成分研究的基础上 ，本研
361.30 93.53±9.16 9.79 84.23±0.06 0.07 究对齿痛消炎灵颗粒的入血成分进行了研究。其中，芍
芒柄花素 1.23 72.75±5.48 7.53 74.63±9.97 13.36
12.3 88.12±1.63 1.85 76.06±0.04 0.05 药苷、橙皮苷、柚皮素、芒柄花素、甘草次酸5种成分被文
123.00 82.04±3.89 4.74 83.42±6.25 7.49 献报道具有抗炎的药理作用 [7―11] ，尤其是芍药苷已被证
甘草次酸 1.06 87.78±9.30 10.60 99.94±4.87 4.87 [7]
10.60 93.20±5.58 5.99 99.25±3.03 3.05 明对牙周炎具有一定的治疗作用 ，故本研究选取这 5
211.00 93.54±0.48 0.51 93.55±0.21 0.22 种成分为测定指标进行齿痛消炎灵颗粒的药动学研究。
眼内眦取血约 0.5 mL，置于预先肝素化的试管中，以 3.4 药动学评价
本研究结果显示，5种成分中芒柄花素的tmax和t1/2最
3 000 r/min离心5 min，取上层血浆样品，按“2.4”项下方
短，分别为 0.25、0.39 h，推测其在体内发挥药效的结构
法处理样品并进行分析，计算得各成分与内标的峰面积
形式很可能是其代谢物，但未见相关报道，有待进一步
比值。将上述比值代入当日随行的标准曲线中计算出
深入研究。柚皮素的tmax （0.25 h）与芒柄花素tmax相同，但
各待测成分在血浆样品中的质量浓度。各成分在大鼠
其 t1/2长达 8.96 h，且其药-时曲线出现了双峰现象，这种
体内的药-时曲线见图 3。采用 DAS 3.0 软件，通过非房
情况很可能是齿痛消炎灵颗粒中的柚皮苷在胃肠道内
室模型运算，最终得出各待测成分在大鼠体内的主要药
被水解生成柚皮素后吸收入血，或是进入体内的柚皮苷
动学参数，详见表4。
被代谢生成柚皮素造成的。在这5种成分中，甘草次酸
3 讨论 的 AUC0-24 h和 AUC0-∞最大，这可能是由于齿痛消炎灵颗

3.1 质谱条件和色谱条件的选择 粒中甘草药材含有的甘草酸易在体内代谢为甘草次酸，
本研究前期采用正、负离子模式对芍药苷、橙皮苷、 从而导致甘草次酸出现了与柚皮素类似的 tmax短（0.75
柚皮素、芒柄花素、甘草次酸和内标进行扫描发现，在负 h）而t1/2长（2.96 h）的现象。由5种成分在该制剂中的含

中国药房 2023年第34卷第15期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 · 1819 ·