Page 46 - 《中国药房》2023年14期

其中灵芝酸类成分具有直接杀伤肿瘤细胞的作用 [3―4] 。 表1 30批灵芝样品来源信息
灵芝多糖含量、灵芝酸总量是2020年版《中国药典》中灵 编号 基原 产地 编号 基原 产地
芝质量控制的指标，然而紫外分光光度法的专属性不 S1 G. lucidum 四川 S16 G. lucidum 安徽
S2 G. lucidum 四川 S17 G. lucidum 安徽
强，检测时易受皂苷、油酸等物质干扰，无法保证测得的
S3 G. lucidum 四川 S18 G. lucidum 安徽
[5]
总三萜酸含量准确度 。近年来，高效液相色谱（high- S4 G. lucidum 四川 S19 G. lucidum 安徽
performance liquid chromatography，HPLC）法已成为测 S5 G. lucidum 四川 S20 G. lucidum 安徽
定酸类成分的主要手段之一，能有效解决专属性问 S6 G. lucidum 四川 S21 G. lucidum 安徽
S7 G. lucidum 四川 S22 G. lucidum 浙江
题 [6―7] 。但灵芝酸类成分的对照品不易获得，价格昂贵， S8 G. lucidum 四川 S23 G. lucidum 浙江
限制了HPLC法在灵芝酸类成分检测中的应用。 S9 G. lucidum 四川 S24 G. lucidum 浙江
一测多评（quantitative analysis of multi-components S10 G. lucidum 四川 S25 G. lucidum 浙江
S11 G. lucidum 山东 S26 G. lucidum 浙江
by single marker，QAMS）法是利用中药有效成分间的内
S12 G. lucidum 山东 S27 G. lucidum 浙江
在函数关系和比例关系，仅测定1种成分（对照品易得）， S13 G. lucidum 山东 S28 G. lucidum 吉林
来实现多种成分（对照品没有或难以供应）的同步监 S14 G. lucidum 山东 S29 G. lucidum 吉林
[8]
控 ，该方法已广泛应用于中药的质量控制工作中 [9―10] 。 S15 G. lucidum 山东 S30 G. lucidum 吉林
2010 年版《中国药典》首次在中药材黄连项下收载了 积为 10 μL；检测波长为 254 nm；柱温为 30 ℃；流速为
[11]
QAMS法，2015年版《中国药典》增加至9个品种 ，2020 1.0 mL/min。
[4]
年版《中国药典》增加至16个品种 。 2.2 混合对照品溶液的制备
[12]
本研究在前期建立的灵芝 HPLC 指纹图谱 基础 分别精密称取灵芝酸 A、灵芝酸 B、灵芝酸 C2、灵芝
酸D、灵芝酸F、灵芝酸H、灵芝烯酸A、灵芝烯酸B、灵芝
上，拟采用QAMS法，以灵芝酸A为内参物，得到灵芝酸
B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝酸 F、灵芝酸 H、灵芝烯酸 烯酸C、灵芝烯酸D对照品各适量，加入甲醇制成质量浓
度分别为 3.996、4.971、4.568、3.558、4.177、5.440、3.944、
A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵芝烯酸D与灵芝酸A之间
4.994、5.593、4.342 mg/mL的混合对照品溶液。
的相对校正因子，计算出这9种灵芝酸的含量，并与外标
2.3 供试品溶液的制备
法（external standard method，ESM）比较，建立快捷、经
取灵芝样品粉末（过20目筛）约1.0 g，精密称定，置
济、全面的灵芝酸类成分含量测定的 QAMS 法，并对不
同产地灵芝进行质量控制，为其质量标准修订提供 于圆底烧瓶中，加入95%乙醇，加热回流提取2次，每次
40 mL，提取 60 min，滤过，合并滤液，减压干燥，加入 1
参考。
mL 甲醇使溶解，经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得供试
1 材料 品溶液。
1.1 主要仪器
2.4 HPLC含量测定法的建立
本研究所用的主要仪器有 Series Ⅲ型 HPLC 仪（美
国 SSI/ALLCHROM 公司）、Waters 1525 型 HPLC 仪（美 2.4.1 系统适用性试验
取上述混合对照品溶液、供试品溶液、空白对照溶液
国Waters公司）、AL104型分析电子天平[梅特勒·托利多
（甲醇），按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详
仪器（上海）有限公司]等。 见图1（空白对照溶液图略）。由图1可知，灵芝酸A等10
1.2 主要药品与试剂
种成分的分离效果较好，空白对照溶液对测定无干扰。
灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸F、 100 1
灵芝酸 H、灵芝烯酸 A、灵芝烯酸 B、灵芝烯酸 C、灵芝烯
酸 D 对 照 品（批 号 分 别 为 PS000596、PS161017-04、 U/mV 50
PS000597、PS000598、PS00007068-802、PS00007063-816、 2 3 4 5 8 10
PS161026-02、PS161021-01、PS010840、PS000604）均购 0 6 7 9
自成都普思生物科技股份有限公司，纯度均在 98% 以 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
t/min
上，可供含量测定用；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析 A.混合对照品溶液
纯。实验用的30批灵芝样品信息见表1，经四川省中医
600
药科学院罗霞研究员鉴定为真品。
2 方法与结果 U/mV 400 6
200
2.1 色谱条件 1 2 3 4 5 7 8 9 10
0
色 谱 柱 为 ZORBAX SB C18 （250 mm×4.6 mm，5 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
μm）；以乙腈（A）-0.1%乙酸溶液（B）为流动相进行梯度 t/min
B.灵芝样品溶液（编号S26）
洗 脱（0～20 min，30%A→31%A；20～30 min，31%A； 1：灵芝烯酸C；2：灵芝酸C 2；3：灵芝烯酸B；4：灵芝酸B；5：灵芝烯
30～60 min，31%A→32%A；60～80 min，32%A→40%A； 酸A；6：灵芝酸A；7：灵芝酸H；8：灵芝烯酸D；9：灵芝酸D；10：灵芝酸F。
80～85 min，40%A；85～90 min，40%A→82%A）；进样体 图1 混合对照品溶液和灵芝样品溶液的HPLC色谱图

· 1704 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 中国药房 2023年第34卷第14期