Page 47 - 《中国药房》2023年14期

2.4.2 线性关系考察 H、灵芝烯酸 A、灵芝烯酸 B、灵芝烯酸 C、灵芝烯酸 D 的
分别精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液 0.04、 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 99.43%、100.25%、98.50%、
0.10、0.25、1.0、2.5、5.0 mL 置于 5 mL 容量瓶中定容，制 99.88%、100.59%、99.64%、98.50%、99.40%、99.64%、
得 6 种不同质量浓度的混合对照品溶液。按照“2.1”项 99.76%，RSD 分 别 为 1.20%、1.41%、0.83%、1.10%、
下色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐 1.09%、1.11%、0.96%、0.71%、0.93%、0.95%（n＝6），表明
标、质量浓度（X）为横坐标作回归曲线方程，各成分在相 该方法准确度良好。
应的质量浓度范围内线性关系良好。结果见表2。 2.5 QAMS法的建立
表2 10种灵芝酸类成分的线性关系考察结果 2.5.1 相对校正因子计算
取混合对照品溶液分别进样2、4、6、8、10、20 μL，测
对照品 回归方程 线性范围/（mg/mL） R 2
灵芝酸A Y＝3×10 X－434 733 0.032～3.996 0.999 4 定并记录峰面积。以性质稳定、价廉易得的灵芝酸 A
6
灵芝酸B Y＝5×10 X－831 880 0.040～4.971 0.999 4 （k）为内参物，按公式fk/m＝fk/fm＝Wk×Am/（Wm×Ak ） 计算
[9]
6
6
Y＝4×10 X－475 593 0.037～4.568 0.999 9
灵芝酸C 2 灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸F、灵芝酸H、灵芝
灵芝酸D Y＝3×10 X－334 275 0.028～3.558 0.999 9
6
灵芝酸F Y＝5×10 X－540 651 0.033～4.177 0.999 9 烯酸 A、灵芝烯酸 B、灵芝烯酸 C、灵芝烯酸 D 的相对校
6
灵芝酸H Y＝3×10 X－407 794 0.044～5.440 0.999 8 正因子，式中 Ak为内参物峰面积，Wk为内参物质量或浓
6
灵芝烯酸A Y＝2×10 X－2×10 6 0.032～3.944 0.999 8 度，Am为待测成分的峰面积，Wm为待测成分的质量或浓
6
灵芝烯酸B Y＝1×10 X－2×10 6 0.040～4.994 0.999 8 度。结果显示，灵芝酸 B、灵芝酸 C2等灵芝酸类成分的
7
灵芝烯酸C Y＝2×10 X－1×10 6 0.045～5.593 0.999 2
7
灵芝烯酸D Y＝1×10 X－1×10 6 0.035～4.342 0.999 2 相对校正因子平均值分别是 1.788 5、1.288 2、1.126 4、
7
1.698 5、0.885 4、5.468 1、4.210 9、5.780 8、4.290 3。
2.4.3 精密度试验
2.5.2 待测成分的色谱峰定位
精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下
以灵芝酸 A 为基准峰，计算其他 9 种成分的相对保
色谱条件重复进样6次，记录10种对照品的峰面积。结
留时间，确定其在色谱图中的位置。结果显示，灵芝酸
果显示，灵芝酸 A、灵芝酸 B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝
B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝酸 F、灵芝酸 H、灵芝烯酸
酸F、灵芝酸H、灵芝烯酸A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵
A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵芝烯酸D的相对保留时间
芝烯酸 D 的峰面积 RSD 分别为 1.64%、1.05%、0.89%、
平均值分别是0.429 2、0.476 3、0.674 8、0.740 2、0.867 6、
1.65%、1.08%、0.96%、1.66%、1.37%、0.81%、0.99%（n＝
1.067 6、1.373 5、1.504 5、1.844 6。
6），表明方法精密度良好。
2.5.3 相对校正因子和相对保留时间的耐用性考察
2.4.4 稳定性试验
考察 Series Ⅲ型、Waters 1525 型 2 种 HPLC 仪及
取同一供试品溶液（编号S1），分别于0、2、4、8、16、
ZORBAX SB-C18、Alltima C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）2
24 h时按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积。结果显
种色谱柱对相对校正因子和相对保留时间的影响。结果
示，灵芝酸 A、灵芝酸 B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝酸 F、
显示，灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸F、灵芝酸H、
灵芝酸 H、灵芝烯酸 A、灵芝烯酸 B、灵芝烯酸 C、灵芝烯
灵芝烯酸A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵芝烯酸D相对校
酸D的峰面积RSD分别为1.22%、1.65%、1.53%、0.98%、 正 因 子 的 RSD 分 别 为 0.86%、0.47%、0.95%、1.13%、
1.17%、0.67%、0.98%、1.28%、1.16%、1.45%（n＝6），表明
1.68%、0.98%、1.63%、1.07%、1.97%（n＝3），相对保留时
供试品溶液在24 h内稳定。 间的 RSD 分别为 1.90%、1.97%、1.55%、1.40%、1.34%、
2.4.5 重复性试验 1.01%、1.38%、0.81%、0.84%（n＝3），表明不同仪器和色
取同一批样品6份（编号S1），分别按“2.3”项下方法 谱柱对相对校正因子和相对保留时间无明显影响。
制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，测定并记 2.6 样品测定
录峰面积，按标准曲线法计算含量。结果显示，灵芝酸 按“2.3”项下方法制备不同产地灵芝供试品溶液
A、灵芝酸 B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝酸 F、灵芝酸 H、 （n＝3），按“2.1”项下色谱条件进样测定，分别采用
灵芝烯酸 A、灵芝烯酸 B、灵芝烯酸 C、灵芝烯酸 D 的含 QAMS 法和 ESM 计算含量及相对误差（relative error，
量 RSD 分 别 为 1.35%、1.21%、1.68%、0.86%、1.07%、 RE），结果见表3。两种方法所得结果无明显差异，说明
1.52%、1.42%、0.99%、0.65%、1.71%（n＝6），表明该方法 QAMS法可用于评价灵芝的多种灵芝酸类成分含量。
重复性良好。 3 讨论
2.4.6 加样回收率试验 灵芝酸类成分是灵芝主要的功效成分，但大多数灵
取6份已知含量的同一样品粉末（编号S1）1.0 g，精 芝酸类成分的对照品不易获得，限制了HPLC法在其检
密称定，按 1∶1 的比例精密加入各对照品溶液，按“2.3” 测中的应用。本文在前期研究的基础上，以灵芝中含量
项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样， 较高且稳定、对照品相对容易获得的灵芝酸 A 为内参
测定并记录峰面积，计算加样回收率。结果显示，灵芝 物，通过优化色谱条件，建立了QAMS法。
酸 A、灵芝酸 B、灵芝酸 C2、灵芝酸 D、灵芝酸 F、灵芝酸 本研究分别考察了不同品牌 HPLC 仪和色谱柱对

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1705 ·