Page 31 - 《中国药房》2023年14期

10 5 10 5 10 5 Bax 21 kDa
Bcl-2 26 kDa
10 4 10 4 10 4
PI PI PI
10 3 10 3 10 3 cleaved caspase-3 17 kDa

β-actin 43 kDa
10 2 10 2 10 2
对照组 4 8
2
4
3
4
2
10 10 10 10 5 10 10 10 10 5 10 10 10 10 5
2
3
4
3
Annexin Ⅴ-FITC Annexin Ⅴ-FITC Annexin Ⅴ-FITC PPⅥ组/（μmol/L）
A.对照组的凋亡流式图 B. PPⅥ 4 μmol/L组的凋亡流式图 C. PPⅥ 8 μmol/L组的凋亡流式图 D.凋亡相关蛋白表达的电泳图
图3 PPⅥⅥ对细胞凋亡影响的流式图及对凋亡相关蛋白表达影响的电泳图
表2 PPⅥⅥ对细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响 4 讨论
（x±s，n＝3） PPⅥ是从中药重楼中提取出来的一种甾体皂苷类
凋亡相关蛋白 活性成分，具有抗肿瘤、镇静镇痛、抗炎和调节免疫等作
组别 细胞凋亡率/%
Bax Bcl-2 cleaved caspase-3 用 [11,15] 。研究发现，PPⅥ对脑胶质瘤细胞有一定的抑制
对照组 2.87±2.34 0.14±0.02 1.32±0.03 0.60±0.04 [12―13]
PPⅥ 4 μmol/L组 17.28±3.58 a 0.26±0.04 a 0.93±0.06 b 1.19±0.02 a 作用 。脑胶质瘤是较为常见的成人中枢神经系统
PPⅥ 8 μmol/L组 39.06±6.66 b 0.67±0.05 b 0.54±0.02 b 2.96±0.03 b 原发性恶性肿瘤，发病率和病死率均较高，且异常增殖
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。 和异常分化是其基本特征，故增殖抑制能力是评价抗脑
[3]
胶质瘤药物干预效果的重要指标之一 。本研究结果显
Fas 45 kDa 示，PPⅥ可使人脑胶质瘤 LN229 细胞的存活率下降，并
有一定的浓度-时间依赖趋势；同时，该成分能抑制细胞
FasL 31 kDa
的克隆形成，表明其对人脑胶质瘤LN229细胞的增殖具
cleaved caspase-8 22 kDa
有抑制作用。
β-actin 43 kDa 肿瘤细胞一般表现为失控性增殖，所以诱导其死亡
对照组 4 8 是肿瘤治疗策略的一个重要方向。细胞凋亡是一种受
PPⅥ组/（μmol/L）
A. Fas、FasL和cleaved caspase-8 严格控制的细胞死亡模式，Bcl-2 蛋白酶家族与其密切
相关：当细胞受到信号分子刺激后，Bax被激活而与Bcl-
p-Akt 60 kDa 2形成多聚体，最终激活caspase-3等凋亡执行蛋白，激活
Akt 62 kDa 后的 caspase-3 被切割为 cleaved caspase-3，后者能破坏
细胞功能，诱导细胞凋亡 [16―17] 。本研究首先应用流式细
β-actin 43 kDa
胞术检测了细胞凋亡情况，结果显示，与对照组比较，
对照组 4 8
PPⅥ组/（μmol/L） PPⅥ各浓度组细胞的凋亡率均显著升高，且有随药物浓
B. p-Akt和Akt 度增加而升高的趋势。随后，本研究应用 Western blot
法分析了PPⅥ对细胞凋亡相关蛋白表达的影响，结果显
p-GSK-3β 46 kDa
示，与对照组比较，PPⅥ各浓度组细胞中 Bax、cleaved
GSK-3β 48 kDa
caspase-3 蛋白的表达水平均显著升高，Bcl-2 蛋白的表
β-actin 43 kDa 达水平均显著降低，表明 PPⅥ具有诱导 LN229 细胞凋
对照组 4 8 亡的作用。
PPⅥ组/（μmol/L）
C. p-GSK-3β和GSK-3β Fas/FasL死亡受体通路在细胞凋亡中发挥着重要的
图4 PPⅥⅥ对细胞 Fas/FasL、Akt/GSK-3ββ 通路相关蛋 作用：Fas与配体FasL结合后，可发生构象改变，随后在
膜内区域通过 DD 结构域连接接头蛋白 FADD 将 cas‐
白表达影响的电泳图
pase-8活化为cleaved caspase-8，后者可直接切割和激活
表3 PPⅥⅥ对细胞 Fas/FasL、Akt/GSK-3ββ 通路相关蛋 下游的 caspase-7、caspase-3，最终通过 caspase 信号级联
白表达的影响（x±s，n＝3） 反应来诱导细胞凋亡的发生 。本研究结果显示，PPⅥ
[18]
Fas/FasL通路 Akt/GSK-3β通路 各浓度组细胞中 Fas、FasL、cleaved caspase-8 蛋白的表
组别
Fas FasL cleaved caspase-8 p-Akt/Akt p-GSK-3β/GSK-3β 达水平均较对照组显著升高，提示 PPⅥ诱导 LN229 细
对照组 0.15±0.06 0.13±0.02 0.09±0.02 1.77±0.03 1.17±0.06
PPⅥ 4 μmol/L组 0.39±0.03 a 0.37±0.04 a 0.37±0.06 b 1.08±0.02 a 0.98±0.05 b 胞凋亡的作用可能与激活Fas/FasL死亡受体通路相关。
[19]
PPⅥ 8 μmol/L组 0.61±0.04 b 0.68±0.02 b 0.53±0.03 b 0.42±0.07 b 0.42±0.07 b Akt/GSK-3β 通路可调控细胞增殖和凋亡 。活化
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与对照组比较，P＜0.01。 的 Akt 可通过促进下游底物（如 GSK-3β）的磷酸化来参

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1689 ·