Page 14 - 《中国药房》2023年14期
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肺纤维化是由多种病因引起的一种慢性炎症性间                           6）ELISA试剂盒、β-肌动蛋白（β-actin）抗体（批号分别为
          质性肺疾病。不明原因引起的肺间质纤维化称为特发                             ab575438、ab6842340、ab367894）均购自武汉博士德生
          性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF），其主要        物 工 程 有 限 公 司 ；BCA 蛋 白 定 量 试 剂 盒（批 号
          病理表现为成纤维细胞过度增殖和细胞外基质的过度                             EKPR1764c）购自美国Pierce公司；兔抗大鼠紧密连接蛋
              [1]
          沉积 。IPF 因其病因和发病机制复杂，导致其预后较                          白 1（zonula  occludens-1，ZO-1）多 克 隆 抗 体（批 号
          差，且无法治愈。目前IPF治疗多选择糖皮质激素、免疫                          20210105）购自北京索莱宝科技有限公司；辣根过氧化
          抑 制 剂 和 抗 纤 维 化 药 物 等 ，但 疗 效 有 限 且 存 在 副            物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 GB21306）购自武
          作用  [2―3] 。                                         汉赛维尔生物科技有限公司；罗丹明6G（批号252414，纯
              补阳还五汤（BYHW）由清代名医王清任创立，由黄                        度99%）购自德国AG Chemie公司；苏木精、伊红染液（批
          芪、当归尾、赤芍、红花、川芎、地龙等组成，原方主治中                          号分别为YL2102151、YL2101231）均购自北京益利精细
          风后遗症。现有报道表明，该方可改善肺纤维化患者肺                            化学品有限公司；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
          功能、运动功能和生活质量 。方中黄芪、当归、川芎、赤                          1.3 动物
                                 [4]
                                           [5]
          芍等单药均有一定的抗肺纤维化作用 ，但该方的作用                                SPF 级 Wistar 大鼠 96 只，雌雄各半，6 周龄，体重
          机制尚不完全清楚。本研究通过博来霉素诱导IPF大鼠                           200～220 g，由山西医科大学动物实验中心提供，动物生
          模型，考察BYHW对模型大鼠肺微循环及纤维化相关指
                                                              产许可证号为 SCXK（晋）2019-0004。大鼠在山西中医
          标羟脯胺酸（hydroxyproline，HYP）、转化生长因子 β1                 药大学屏障实验室适应性喂养1周后进行实验。所有涉
         （transforming growth factor-β1，TGF-β1 ）等的影响，以期
                                                              及的实验动物操作均严格按照山西中医药大学动物伦
          为阐明 BYHW 干预 IPF 的作用机制以及中医药治疗肺                       理 相 关 规 定 和 要 求 执 行 ，动 物 伦 理 批 准 编 号 为
          纤维化提供理论依据。                                          AWE202102267。
          1 材料                                                2 方法
          1.1 主要仪器
                                                              2.1 动物分组与给药
              本研究主要仪器包括 L535R-1 型低速冷冻离心机
                                                                  将 96 只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组
         （长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司）、                            和BYHW低、中、高剂量组，每组16只。除空白组以外，
          Agilent1260型高效液相色谱（HPLC）仪[奥豪斯仪器（上
                                                              其余各组大鼠参照文献方法通过气管注入盐酸博来霉
          海）有限公司]、BXS1W1型正置荧光显微镜（日本Olym‐                      素溶液（5 mg/kg）建立大鼠IPF模型 。造模当天开始给
                                                                                            [7]
          pus公司）等。
          1.2 主要药品与试剂                                         药，空白组和模型组大鼠按 10 mL/kg 灌胃生理盐水，阳
                                                              性对照组大鼠按5 mg/kg灌胃地塞米松溶液，BYHW低、
              BYHW[批号 20210113，规格 25.35 µg/g（以黄芪甲
                                                              中、高剂量组大鼠给药剂量依据鼠与人的体表面积进行
          苷计）]由山西中医药大学附属医院药剂科制剂室按照
                                                              换算，分别按2.5、5、10 g/kg（以生药量计，低剂量相当于
          生黄芪 120 g、当归尾 6 g、赤芍 4.5 g、桃仁 3 g、红花 3 g、
                                 [6]
          川芎3 g、地龙3 g比例制备 ，其中生黄芪于2018年8月                      成人常用量）灌胃BYHW药液，每天1次，连续给药28 d。
                                                              2.2 行为学和一般状态观察
          采自山西省应县南泉乡麻峪村，经应县乾宝黄芪种植专
                                                                  观察所有大鼠在实验过程中的毛皮光亮润泽程度，
          业合作社专家刘仲秀药师鉴定为豆科植物蒙古黄芪As‐
          tragalus  membranaceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus  呼吸、饮食、活动等状态。
                                                              2.3 体重测量
         （Bge.）Hsiao的根，3～4年生，制成饮片备用；当归尾、赤
          芍、桃仁、红花、川芎、地龙饮片均由山西中医药大学附                               分别在造模后第 0、7、14、21、28 天测量各组大鼠体
          属医院提供，经其药剂科武晓红副主任药师鉴定均为真                            重，进一步评估大鼠的整体状况。
          品，当归尾原产地甘肃（批号200318），赤芍、川芎原产地                       2.4 肺细静脉内黏附白细胞微循环动态可视化观察
          均为四川（批号分别为 200524、200209），桃仁原产地山                        末次给药后，每组取6只大鼠，按1 mL/kg腹腔注射
          东（批号 200415），红花原产地新疆（批号 200111），地龙                  20%乌拉坦溶液进行麻醉，用带有肺脏压片固定装置的
          原产地广东（批号 200119）。地塞米松片（阳性对照药                        固定板将大鼠固定，剥离左侧股静脉，插管，固定，颈部
          物，批号20210514，规格0.75 mg×100片）购自天津力生                  正中切开2 cm切口，剥离气管，连接呼吸机，于左侧胸腔
          制 药 股 份 有 限 公 司 ；注 射 用 盐 酸 博 来 霉 素（批 号              第 3～5 肋间部位行胸廓切开术，暴露左肺内侧，观察 5
          21043821，规格 15 mg/支）购自浙江海正辉瑞制药有限                    min。经左侧股静脉插管缓慢注入罗丹明6G 0.1 mg/kg，
          公司；HYP 酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒（批号                        用以标记白细胞；使用呼吸机通过三通管接持续气流，
          22211107）购 自 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 ；TGF-            将氧气含量控制在33%左右，维持肺扩张状态。使用正
          β1 ELISA 试剂盒（批号 201706）购自上海研吉生物科技                   置显微镜观察肺微循环并录像，观察时选择直径 30～
          有限公司；肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，              50 μm的肺细静脉，用Image-Pro Plus 5.0软件，分析200
                                                                                               [8]
          TNF-α）ELISA 试剂盒、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-           μm长肺细静脉内的黏附白细胞的数量 。

          · 1672 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 14                            中国药房  2023年第34卷第14期
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