Page 15 - 《中国药房》2023年14期

2.5 血清中 TNF-α、IL-6 和肺组织中 TNF-α、IL-6、 时间比较，BYHW 高、中剂量组和阳性对照组大鼠造模
HYP、TGF-β1含量检测 第14、21、28天时体重均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。
末次给药后，取每组剩余的全部大鼠，腹主动脉采 结果见表1。
血后，处死，分离肺脏，取右肺中叶制成 10% 的组织匀 表1 各组大鼠体重变化（x±s，g）
浆，按 ELISA 试剂盒说明书操作，检测血清中 TNF-α、 组别 n 第0天 第7天 第14天 第21天 第28天
IL-6含量和肺组织中TNF-α、IL-6、HYP、TGF-β1含量。 空白组 16 198.5±14.9 235.4±20.7 287.5±21.6 338.5±26.7 381.4±28.6
模型组 16或14 203.2±15.1 186.6±22.1 196.9±30.1 a 204.8±32.4 b 218.2±35.5 b
2.6 肺组织中ZO-1蛋白表达检测 阳性对照组 16 202.8±15.3 203.9±23.2 244.7±27.5 c 295.5±28.7 c 341.4±33.6 d
2.6.1 免疫荧光染色法 BYHW低剂量组 16 200.4±16.0 187.3±22.6 211.8±31.0 220.7±29.6 223.6±35.7
取“2.4”项下大鼠的左肺下叶组织，切片，脱蜡，置于 BYHW中剂量组 16 197.5±15.3 185.9±20.8 211.5±26.3 c 249.5±25.5 c 288.8±30.4 c
BYHW高剂量组 16 201.1±14.8 191.7±22.7 232.5±25.3 c 276.6±27.6 c 334.7±32.7 d
枸橼酸缓冲液中进行微波修复 15 min，冷却至室温，室
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与空白组比较，P＜0.01；c：与模型组
温封闭30 min，加入兔抗大鼠ZO-1多克隆抗体（稀释比
比较，P＜0.05；d：与模型组比较，P＜0.01。
为 1∶50），4 ℃孵育过夜；次日用磷酸盐缓冲液洗涤后，
3.3 肺细静脉内黏附白细胞数量变化
加入山羊抗兔IgG二抗（稀释比为1∶1 000），室温孵育1 与空白组比较，模型组大鼠肺细静脉内黏附白细胞
h 后，封片，于暗室条件下采用荧光显微镜观察并拍照， 数量显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，BYHW 高、中
记录ZO-1阳性表达情况。 剂量组和阳性对照组大鼠肺细静脉内黏附白细胞数量
2.6.2 Western blot法 均显著减少（P＜0.05或P＜0.01）。结果见图1和图2。
取“2.5”项下大鼠的左肺上叶组织 100 mg，裂解后
制成匀浆，于 4 ℃下以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清
液，按 BCA 法测定蛋白浓度，然后 100 ℃加热变性 5
min，电泳，转膜，封闭；洗涤后加入一抗 ZO-1、β-actin
（稀释比分别为 1∶1 000、1∶6 000），4 ℃孵育过夜；次
日用 TBST 缓冲液洗脱 3 次，加入相应二抗（稀释比
A.空白组 B.模型组
为1∶20 000），室温孵育1 h后，ECL显色。采用Quantity
One 软件进行图像分析，以 β-actin 为内参，以目的条带
与内参条带的灰度值比值作为ZO-1蛋白表达水平。
2.7 肺组织病理形态学观察
取“2.5”项下大鼠的右肺下叶组织适量，用甲醛固
定，离心，包埋，切片，经苏木精-伊红染色后，用显微镜
C.阳性对照组 D. BYHW低剂量组
观察并拍照，记录肺组织病理形态变化。
2.8 统计学方法
采用 SPSS 23.0 和 Origin 7.5 软件进行数据处理。
数据用 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组
间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
3 结果
E. BYHW中剂量组 F. BYHW高剂量组
3.1 行为学和一般状态变化
图1 各组大鼠肺细静脉内黏附白细胞的显微图（×200）
实验过程中，空白组大鼠饮食正常，呼吸平稳顺畅，
40 a
毛皮光亮润泽，活泼好动，强壮肥硕。与空白组比较，模
型组大鼠 24 h 内进食量相对减少，活动明显减少，其他
30
无明显变化；24～48 h 内进食量和饮水量明显下降，呼 c
吸急促，身体抖动、集聚成团，皮毛耸立、似恶寒颤栗状， 白细胞数量/个 20 b b
部分大鼠出现眼、鼻出血；第3、4天各死亡1只；7 d后进
10
食量和饮水量开始逐渐增加，一般状态逐渐恢复。与模
型组比较，各药物组大鼠上述症状均有不同程度改善， 0
且没有出现死亡情况。 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
Ⅰ：空白组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：阳性对照组；Ⅳ：BYHW低剂量组；Ⅴ：
3.2 体重变化 BYHW中剂量组；Ⅵ：BYHW高剂量组；a：与空白组比较，P＜0.01；b：
与空白组同时间比较，模型组大鼠造模第14、21、28 与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组比较，P＜0.05。
天时体重均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；与模型组同 图2 各组大鼠肺细静脉内黏附白细胞数量比较（n＝6）

中国药房 2023年第34卷第14期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 14 · 1673 ·