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表2 各组小鼠血清中IL-2、IL-23、IFN-γ水平测定结果 方是在中医古方地黄饮子基础之上化裁而来,方中运用
(x±s,n=10,pg/mL) 中医阴阳理论、藏象理论、整体思维等,温清并用,补泻
组别 IL-23 IL-2 IFN-γ 兼施,体现了中医在治疗疾病时调节机体达到和谐状态
正常组 74.55±6.93 257.33±37.71 50.87±16.34 的整体、系统思想。
模型组 84.32±7.25 a 321.06±17.93 b 86.00±18.76 b
AAV-β组 68.32±7.16 c 306.01±20.64 124.41±21.85 c 本研究采用 MOG35-55多肽联合结核杆菌、百日咳毒
中药组 69.26±5.72 c 275.23±33.71 cd 66.50±15.99 ef 素诱导 EAE,采用临床治疗 MS 的一线药物醋酸泼尼松
AAV-β+中药组 65.16±3.82 c 282.71±51.30 73.44±42.60 f 作为阳性对照药物 ,研究中药的作用机制。结果显
[11]
阳性对照组 67.99±4.61 c 312.51±24.82 58.11±39.58 cf
示,通过尾静脉注射 AAV-β 后,EAE 模型小鼠脑和脊髓
a:与正常组比较,P<0.05;b:与正常组比较,P<0.01;c:与模型组
中β-arrestin1的表达量下降,临床症状有所减轻,在此基
比较,P<0.01;d:与AAV-β组比较,P<0.05;e:与模型组比较,P<
0.05;f:与AAV-β组比较,P<0.01 础之上给予中药益肾达络饮干预后,升高了小鼠脑与脊
中药组、阳性对照组小鼠脑和脊髓组织中上述大部分 髓中β-arrestin1的表达量,神经功能评分进一步降低。
+
指标(除 AAV-β 组脑组织中的 CREB、cAMP 蛋白外)表 活化的CD4 T细胞可通过产生IL-12、TNF-α、IFN-γ
达水平均显著逆转(P<0.05 或 P<0.01)。与 AAV-β 组 等促炎因子来介导和放大炎症反应,激活星形胶质细
比较,中药组、AAV-β+中药组、阳性对照组小鼠脑组织 胞,进而导致血脑屏障的通透性增加,并在免疫细胞分
中 PKA、cAMP 蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),脊 泌的黏附分子、趋化因子等影响下通过血脑屏障进入中
髓组织中 PKA 蛋白表达水平显著升高、β-arrestin1 表达 枢,进而引起神经损伤,造成 MS 局部脱髓鞘和轴索损
[12]
水平显著降低(P<0.05或P<0.01);中药组小鼠脑组织 伤 。MS 患者脑脊液中的 IL-2 水平升高,而 IL-2 对调
中β-arrestin1表达水平、AAV-β+中药组小鼠脊髓组织中 节性 T 细胞稳态具有重要作用;此外,IL-2 还可以抑制
cAMP 蛋白表达水平及阳性对照组小鼠脊髓组织中 Th17细胞的分化,在中枢神经系统炎性疾病中发挥促炎
[13]
CREB、cAMP蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P< 作用 。IL-23和IFN-γ是MS发病机制中的关键细胞因
[14]
0.01)。结果见图5、表3。 子,可以诱发和加重 MS 和 EAE 。β-arrestin1 是 IFN-γ
[15]
4 讨论 的负调控因子,可降低 IFN-γ 的表达 。本研究结果显
中医虽无MS的病名,但是根据MS的临床症状,可 示,EAE模型小鼠血清中炎症因子IL-2、IL-23、IFN-γ的
将MS归于“痿证”“肌痹”“青盲”等进行论治。MS的病 表达水平升高,而益肾达络饮可以降低EAE模型小鼠血
机主要是肾精不足、湿浊内蕴、浊毒内生、毒损督脉、络 清中上述因子的表达。
损髓伤、败坏形体,根据这样的病机特点,高颖教授创立 β-arrestin1是G蛋白偶联受体向核内传递信号的重
[5]
了益肾、解毒、通络法,制定了中药复方益肾达络饮。本 要介质和支架蛋白 。相关研究显示,β-arrestin1可抑制
β-arrestin1 47 kDa β-arrestin1 47 kDa
PKA 40 kDa PKA 40 kDa
CREB 37 kDa CREB 37 kDa
cAMP 24 kDa cAMP 24 kDa
GAPDH 38 kDa GAPDH 38 kDa
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ
A.脑组织 B.脊髓组织
Ⅰ:正常组;Ⅱ:模型组;Ⅲ:AAV-β组;Ⅳ:中药组;Ⅴ:AAV-β+中药组;Ⅵ:阳性对照组
图5 各组小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达的电泳图
表3 各组小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平的测定结果(x±s,n=3)
β-arrestin1/GAPDH PKA/GAPDH CREB/GAPDH cAMP/GAPDH
组别
脑组织 脊髓组织 脑组织 脊髓组织 脑组织 脊髓组织 脑组织 脊髓组织
正常组 0.69±0.06 1.57±0.04 1.15±0.03 0.99±0.02 0.97±0.08 1.27±0.21 1.33±0.07 0.81±0.03
模型组 1.87±0.03 a 1.96±0.08 b 0.36±0.05 a 0.39±0.03 a 0.67±0.11 a 0.37±0.05 a 1.00±0.04 b 0.53±0.02 b
AAV-β组 0.69±0.11 c 1.65±0.22 d 0.63±0.23 c 0.59±0.03 c 0.74±0.02 0.98±0.11 d 1.06±0.11 0.99±0.07 c
中药组 0.96±0.06 ce 1.27±0.04 ce 0.90±0.05 cf 1.01±0.06 cf 0.89±0.06 d 1.00±0.16 d 1.38±0.10 cf 1.00±0.03 c
AAV-β+中药组 0.64±0.02 c 0.79±0.06 cf 1.25±0.10 cf 0.76±0.05 ce 0.92±0.04 d 0.98±0.14 d 1.46±0.12 cf 1.27±0.09 cf
阳性对照组 0.84±0.49 c 1.38±0.06 ce 1.01±0.01 cf 1.11±0.04 cf 0.91±0.01 d 1.40±0.19 cf 1.54±0.04 cf 1.26±0.09 cf
a:与正常组比较,P<0.01;b:与正常组比较,P<0.05;c:与模型组比较,P<0.01;d:与模型组比较,P<0.05;e:与AAV-β组比较,P<0.05;f:与
AAV-β组比较,P<0.01
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