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表2 各组小鼠血清中IL-2、IL-23、IFN-γ水平测定结果                    方是在中医古方地黄饮子基础之上化裁而来,方中运用
               (x±s,n=10,pg/mL)                               中医阴阳理论、藏象理论、整体思维等,温清并用,补泻
           组别              IL-23       IL-2       IFN-γ       兼施,体现了中医在治疗疾病时调节机体达到和谐状态
           正常组           74.55±6.93  257.33±37.71  50.87±16.34  的整体、系统思想。
           模型组           84.32±7.25 a  321.06±17.93 b  86.00±18.76 b
           AAV-β组        68.32±7.16 c  306.01±20.64  124.41±21.85 c  本研究采用 MOG35-55多肽联合结核杆菌、百日咳毒
           中药组           69.26±5.72 c  275.23±33.71 cd  66.50±15.99 ef  素诱导 EAE,采用临床治疗 MS 的一线药物醋酸泼尼松
           AAV-β+中药组     65.16±3.82 c  282.71±51.30  73.44±42.60 f  作为阳性对照药物 ,研究中药的作用机制。结果显
                                                                               [11]
           阳性对照组         67.99±4.61 c  312.51±24.82  58.11±39.58 cf
                                                              示,通过尾静脉注射 AAV-β 后,EAE 模型小鼠脑和脊髓
             a:与正常组比较,P<0.05;b:与正常组比较,P<0.01;c:与模型组
                                                              中β-arrestin1的表达量下降,临床症状有所减轻,在此基
          比较,P<0.01;d:与AAV-β组比较,P<0.05;e:与模型组比较,P<
          0.05;f:与AAV-β组比较,P<0.01                             础之上给予中药益肾达络饮干预后,升高了小鼠脑与脊
          中药组、阳性对照组小鼠脑和脊髓组织中上述大部分                             髓中β-arrestin1的表达量,神经功能评分进一步降低。
                                                                            +
          指标(除 AAV-β 组脑组织中的 CREB、cAMP 蛋白外)表                       活化的CD4 T细胞可通过产生IL-12、TNF-α、IFN-γ
          达水平均显著逆转(P<0.05 或 P<0.01)。与 AAV-β 组                 等促炎因子来介导和放大炎症反应,激活星形胶质细
          比较,中药组、AAV-β+中药组、阳性对照组小鼠脑组织                         胞,进而导致血脑屏障的通透性增加,并在免疫细胞分
          中 PKA、cAMP 蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),脊                    泌的黏附分子、趋化因子等影响下通过血脑屏障进入中
          髓组织中 PKA 蛋白表达水平显著升高、β-arrestin1 表达                  枢,进而引起神经损伤,造成 MS 局部脱髓鞘和轴索损
                                                                [12]
          水平显著降低(P<0.05或P<0.01);中药组小鼠脑组织                      伤 。MS 患者脑脊液中的 IL-2 水平升高,而 IL-2 对调
          中β-arrestin1表达水平、AAV-β+中药组小鼠脊髓组织中                   节性 T 细胞稳态具有重要作用;此外,IL-2 还可以抑制
          cAMP 蛋白表达水平及阳性对照组小鼠脊髓组织中                            Th17细胞的分化,在中枢神经系统炎性疾病中发挥促炎
                                                                  [13]
          CREB、cAMP蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<                      作用 。IL-23和IFN-γ是MS发病机制中的关键细胞因
                                                                                         [14]
          0.01)。结果见图5、表3。                                     子,可以诱发和加重 MS 和 EAE 。β-arrestin1 是 IFN-γ
                                                                                             [15]
          4 讨论                                                的负调控因子,可降低 IFN-γ 的表达 。本研究结果显
              中医虽无MS的病名,但是根据MS的临床症状,可                         示,EAE模型小鼠血清中炎症因子IL-2、IL-23、IFN-γ的
          将MS归于“痿证”“肌痹”“青盲”等进行论治。MS的病                         表达水平升高,而益肾达络饮可以降低EAE模型小鼠血
          机主要是肾精不足、湿浊内蕴、浊毒内生、毒损督脉、络                           清中上述因子的表达。
          损髓伤、败坏形体,根据这样的病机特点,高颖教授创立                               β-arrestin1是G蛋白偶联受体向核内传递信号的重
                                                                              [5]
          了益肾、解毒、通络法,制定了中药复方益肾达络饮。本                           要介质和支架蛋白 。相关研究显示,β-arrestin1可抑制

                   β-arrestin1                       47 kDa    β-arrestin1                        47 kDa

                     PKA                             40 kDa       PKA                             40 kDa

                     CREB                            37 kDa      CREB                             37 kDa
                     cAMP                            24 kDa      cAMP                             24 kDa

                    GAPDH                            38 kDa     GAPDH                             38 kDa
                           Ⅰ   Ⅱ    Ⅲ   Ⅳ    Ⅴ   Ⅵ                      Ⅰ   Ⅱ    Ⅲ   Ⅳ   Ⅴ    Ⅵ
                                    A.脑组织                                       B.脊髓组织
             Ⅰ:正常组;Ⅱ:模型组;Ⅲ:AAV-β组;Ⅳ:中药组;Ⅴ:AAV-β+中药组;Ⅵ:阳性对照组
                        图5 各组小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达的电泳图
                表3 各组小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平的测定结果(x±s,n=3)
                                β-arrestin1/GAPDH      PKA/GAPDH            CREB/GAPDH          cAMP/GAPDH
          组别
                              脑组织        脊髓组织       脑组织      脊髓组织       脑组织       脊髓组织      脑组织       脊髓组织
          正常组                0.69±0.06  1.57±0.04  1.15±0.03  0.99±0.02  0.97±0.08  1.27±0.21  1.33±0.07  0.81±0.03
          模型组                1.87±0.03 a  1.96±0.08 b  0.36±0.05 a  0.39±0.03 a  0.67±0.11 a  0.37±0.05 a  1.00±0.04 b  0.53±0.02 b
          AAV-β组             0.69±0.11 c  1.65±0.22 d  0.63±0.23 c  0.59±0.03 c  0.74±0.02  0.98±0.11 d  1.06±0.11  0.99±0.07 c
          中药组                0.96±0.06 ce  1.27±0.04 ce  0.90±0.05 cf  1.01±0.06 cf  0.89±0.06 d  1.00±0.16 d  1.38±0.10 cf  1.00±0.03 c
          AAV-β+中药组          0.64±0.02 c  0.79±0.06 cf  1.25±0.10 cf  0.76±0.05 ce  0.92±0.04 d  0.98±0.14 d  1.46±0.12 cf  1.27±0.09 cf
          阳性对照组              0.84±0.49 c  1.38±0.06 ce  1.01±0.01 cf  1.11±0.04 cf  0.91±0.01 d  1.40±0.19 cf  1.54±0.04 cf  1.26±0.09 cf
             a:与正常组比较,P<0.01;b:与正常组比较,P<0.05;c:与模型组比较,P<0.01;d:与模型组比较,P<0.05;e:与AAV-β组比较,P<0.05;f:与
          AAV-β组比较,P<0.01


          · 1330 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 11                            中国药房  2023年第34卷第11期
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