Page 59 - 《中国药房》2023年11期
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with inhibiting the expression of inflammatory factor and activating PI3K/Akt signaling pathway.
          KEYWORDS    Blumea  balsamifera  total  flavonoids；  acute  myocardial  infarction；  phosphoinositide  3-kinase；  protein  kinase  B；
          myocardial protection


                                                                                  1
                                                                                                          13
              我国心血管疾病的死亡人数已经从 2005 年的 309                    制，通过核磁共振氢谱（H-NMR）和核磁共振碳谱（ C-
                                  [1]
          万增加到了2020年的458万 。冠心病作为最常见的心                        NMR）等方法确定其结构，并利用面积归一法计算得到
                                               [2]
          血管疾病之一，其患病率和病死率逐年升高 ，给社会和                          其纯度大于 98%；肌酸激酶同工酶-MB（creatine kinase
          家庭带来了沉重的负担。急性心肌梗死（acute myocar‐                    isoenzyme-MB，CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactate dehydro‐
          dial infarction，AMI）是冠心病最常见的并发症。有文献                genase，LDH）、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，
          报道，AMI 会引起机体发生氧化应激反应，而大量氧自                         TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、IL-1β 测定
                                                  [3]
          由基的产生和聚集会导致细胞结构和功能损伤 。磷脂                           试 剂 盒（批 号 分 别 为 20210719、20210722、20190411、
          酰肌醇 3 激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激       20190125、20190317）均购自南京建成生物工程研究所；
          酶 B（protein kinase B，Akt）信号通路是介导细胞凋亡、              TTC 染色剂（批号 C1360014）购自上海麦克林生化科技
                                  [4]
          生长和存活的重要信号通路 。相关体内外实验证明，                           有限公司；兔抗鼠 Akt、磷酸化 Akt（p-Akt         Thr308 、p-Akt ser473 ）
          该信号通路可通过调节体内炎症、氧化应激来改善心                            和甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate de‐
          功能  [5―6] 。                                        hydrogenase，GAPDH）单克隆抗体均购自美国 CST 公
              艾纳香作为菊科植物艾纳香 Blumea balsamifera                司；兔抗鼠 PI3K、磷酸化 PI3K（p-PI3K       Tyr607 ）单克隆抗体
          DC.的干燥地上部分，除含有挥发油类、多糖类物质外，                         购自美国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔
          还含有大量黄酮类物质 。现代药理学研究表明，艾纳                           免疫球蛋白 G 二抗购自美国 Cell Signaling Technology
                              [7]
          香总黄酮具有抗炎、抗氧化和抗菌等多种药理作用                     [8―10] 。  公司；其余试剂为实验室常用规格，水为纯化水。
          本课题组前期临床研究结果显示，对于需要使用硝酸甘                           1.3 动物
          油的冠心病患者，艾纳香总黄酮能显著降低其硝酸甘油                               本研究所用动物为 SPF 级健康 SD 大鼠，共 107 只，
          的使用量，具有较大的临床应用价值。但艾纳香总黄酮                           体质量为 190～210 g，雌雄兼用，购于广东省医学实验
          是否具有改善 AMI 后的心肌损伤，尚不明确。因此，本                        动物中心，实验动物使用许可证号为 SYXK（粤）2022-
          研究对艾纳香总黄酮抗AMI的药效学进行探索，并基于                          0125。大鼠适应性饲养 3 d 天后开始实验，饲养期间大
          PI3K/Akt信号通路初探其作用机制，以期为将艾纳香总                       鼠自由摄食和饮水。饲养环境温度为 20～26 ℃，相对
          黄酮开发为治疗AMI的新药提供实验参考。                               湿度为40%～70%，每小时不少于15次全新风通风，12 h
          1 材料                                               明暗交替。本研究关于实验动物的处置符合动物伦
          1.1 主要仪器                                           理学要求，且本研究方案通过了广东药科大学实验室
              本研究所用的主要仪器有2150型紫外-可见分光光                       动物伦理委员会的批准（伦理批号为 GDPULACSPF-
          度计[尤尼柯（上海）仪器有限公司]、HX-101E 型电动呼                     2022108）。
          吸机（成都泰盟软件有限公司）、ECG-6511 型心电图检                      2 方法
          测仪（上海光电医用电子仪器有限公司）、YP100型压能                        2.1 艾纳香总黄酮的提取与含量测定
          转换器（南京美易科技有限公司）、MAP2000型生物信号                           取艾纳香药材150 g，按文献[11]方法制备艾纳香总
          分析系统（上海奥尔科特生物科技有限公司）、BS-600M                       黄酮提取物，得率约为1.5%。按文献[12]方法绘制标准
                                                                                                2
          型全自动生化分析仪（迈瑞生物医疗电子股份有限公                            曲线，得回归方程 Y＝23.84X+0.007 7（R ＝0.999 5），式
          司）、iBright 型智能成像系统（美国 Thermo Fisher Scien‐         中X、Y分别表示总黄酮浓度和吸光度。使用紫外-可见
          tific 公司）、ChemiDoc XRS+型化学发光成像系统（美国                光分光光度计测定提取物中总黄酮的吸光度（检测波长
          Bio-Rad公司）等。                                       为 271 nm，对照品为艾纳香甲素），代入标准曲线，计算
          1.2 主要药品与试剂                                        得提取物中总黄酮的含量为71%。
              艾纳香药材于2018年10月采摘自贵州省苗药生物                       2.2 大鼠AMI模型的建立
          技术有限公司种植基地，其含蜡标本由深圳海王医药科                               用 25% 乌拉坦麻醉大鼠后，腹腔注射 0.5% 利多卡
          技研究院保存，经中国医学科学院药用植物研究所郭宝                           因 0.2 mL/kg 预防心律失常。将大鼠仰卧位固定，气管
          林研究员鉴定为菊科植物艾纳香 Blumea balsamifera                  插管，接呼吸机，进行机械通气，以针状电极插入四肢皮
          DC. 的 地 上 部 分 ；复 方 丹 参 片（阳 性 对 照 药 ，批 号            下，监测标准肢体Ⅱ导联心电图。在大鼠左胸第4～5肋
          030926，规格 300 mg/片）购自上海雷允上药业有限公                    骨间作横切口，进行钝性分离打开胸腔，剪开心包，轻压
          司；艾纳香甲素对照品（批号 20160112）为本实验室自                      右胸，挤出心脏，在左心耳下方约2 mm处结扎冠状动脉


          中国药房  2023年第34卷第11期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 11    · 1333 ·
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