Page 84 - 中国药房2023年10期

15%A→20%A；30～40 min，20%A→25%A；40～42 2.4.5 稳定性试验 取“2.1.2”项下供试品溶液（编号
min，25%A→35%A；42～50 min，35%A→40%A；50～55 S1），分别在室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.4.1”项
min，40%A→45%A；55～60 min，45%A→95%A；60～65 下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，毛蕊异
min，95%A；65～70 min，95%A→15%A；70～80 min， 黄酮葡萄糖苷、甘草苷、橙皮苷和甘草酸峰面积的 RSD
15%A）；流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；进样量为 10 分别为 1.12%、1.37%、0.65%、0.66%（n＝6），表明供试品
μL；检测波长为 260 nm（0～29.5 min，毛蕊异黄酮葡萄 溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
糖苷）、276 nm（29.5～35 min，甘草苷）、283 nm（35～50 2.4.6 加样回收率试验 取同一批芪桂苓合剂（编号
min，橙皮苷）、251 nm（50～80 min，甘草酸）。该条件下 S1），共 6 份，每份 50 μL，以已知含量的 100% 加入混合
混合对照品溶液及供试品溶液的色谱图见图6。 对照品溶液，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按
140
3 “2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样
120
100 回收率。结果显示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、橙皮
mAU 80 苷和甘草酸的平均加样回收率分别为101.96%、97.13%、
60
40 2 4
20 1 102.07%、98.42%，RSD 分 别 为 1.05%、0.49%、2.56%、
0
1.84%（n＝6）。
0 10 20 30 40 50 60 70
t/min 2.4.7 一测多评法相对校正因子的计算 取“2.1.1”项
A.混合对照品溶液Ⅳ 下混合对照品溶液Ⅰ～Ⅶ，按“2.4.1”项下色谱条件进样
120
3
100 测定，记录峰面积。以橙皮苷（价廉易得且性质稳定、含
80
mAU 60 量较高）为内参物，根据相对校正因子的计算公式 fs/i＝
40 2 4 Asci/Aics （As为内参物峰面积，cs为内参物质量浓度，Ai为
20 1
0 待测成分峰面积，ci为待测成分质量浓度）计算毛蕊异黄
酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸相对于橙皮苷的fs/i。
0 10 20 30 40 50 60 70
t/min 2.4.8 不同仪器和色谱柱对 fs/i的影响 考察不同仪器
B.供试品溶液（编号S1）
1：毛蕊异黄酮葡萄糖苷；2：甘草苷；3：橙皮苷；4：甘草酸 和不同色谱柱对毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸
图6 混合对照品溶液、供试品溶液的HPLC图 的 fs/i的影响。结果显示，不同仪器和色谱柱条件下，毛
蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷和甘草酸的 fs/i均较小（RSD
2.4.2 线性关系考察 取“2.1.1”项下混合对照品溶液
Ⅰ～Ⅶ，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。 均小于2.0%）。结果见表3。
以质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性 表3 不同仪器和色谱柱对毛蕊异黄酮葡萄糖苷等成分
回归。结果见表2。 fs/i的影响
仪器 色谱柱
表2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷等4种成分的回归方程和线 f 橙皮苷/毛蕊异黄酮葡萄糖苷 f 橙皮苷/甘草苷 f 橙皮苷/甘草酸
Agilent 1260 Inertsil ODS-3-C 18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） 1.258 5 1.132 5 2.184 7
性范围 Agilent ZORBAX SB-C 18 （150 mm×4.6 mm，5 μm） 1.282 2 1.156 6 2.202 3
待测成分 回归方程 r 线性范围/（μg/mL） YMC Triart-C 18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） 1.272 8 1.175 8 2.193 7
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 Y＝14.430 0X+6.326 6 0.999 9 2.000～100.000 Shimadzu LC-20A Inertsil ODS-3-C 18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） 1.270 8 1.145 2 2.183 3
甘草苷 Y＝15.932 0X+21.786 0 0.999 9 5.075～253.750 Agilent ZORBAX SB-C 18 （150 mm×4.6 mm，5 μm） 1.270 2 1.143 3 2.194 8
橙皮苷 Y＝17.342 0X+163.010 0 0.999 5 20.400～1 020.000 YMC Triart-C 18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） 1.269 9 1.146 2 2.240 2
甘草酸 Y＝8.357 6X+14.420 0 0.999 9 8.280～414.000 平均值 1.270 7 1.149 9 2.199 8
RSD/% 0.595 6 1.288 6 0.953 7
2.4.3 精密度试验 取“2.1.1”项下混合对照品溶液Ⅲ，
按“2.4.1”项下色谱条件进样 6 次，记录峰面积。结果显 2.4.9 外标法与一测多评法的比较 取 12 批芪桂苓合
示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、橙皮苷和甘草酸峰面 剂，按“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液 3 份，再按
积的RSD分别为0.68%、0.71%、0.75%、0.71%（n＝6），表 “2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。分别按一
[13]
明仪器精密度良好。 测多评法（采用定性用的对照品进行色谱峰的定位 ）
2.4.4 重复性试验 取同一批芪桂苓合剂（编号S1），按 和外标法计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸的
“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液 6 份，再按“2.4.1” 含量，并计算相对误差（relative error，RE），RE＝（一测多
项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计 评法测定值－外标法测定值）/外标法测定值×100%。
算含量。结果显示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、橙皮 结果显示，一测多评法与外标法所测结果的 RE 均小于
[14]
苷和甘草酸含量的 RSD 分别为 0.92%、0.52%、0.20%、 5%，表明2种方法之间差异较小，所测结果基本一致 。
0.76%（n＝6），表明方法重复性良好。 结果见表4。

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