Page 82 - 中国药房2023年10期
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阳、固表止汗的功效，其有效单体毛蕊异黄酮葡萄糖苷                            色谱纯）购自天津市科密欧化学试剂有限公司；甲醇（批
          具有抑制环氧化酶-2的活性、通过抗氧化应激来缓解炎                           号I1036307929，色谱纯）、乙腈（批号20095303，色谱纯）
          症的作用    [2―3] ；陈皮具有理气健脾、燥湿化痰的功效，其                   均购自德国Merck公司。
          主要成分橙皮苷因其自身的 4-羟基-3-甲氧基黄酮结构                         2 方法与结果
          而具有抗病毒活性，且有研究表明，橙皮苷可抑制病毒                            2.1 溶液的制备
          的复制   [4―5] ；甘草具有补脾益气、清热解毒的功效，其主                    2.1.1 混合对照品溶液 分别精密称取毛蕊异黄酮葡
          要成分甘草酸可通过抑制病毒的附着和渗透过程、抑制                            萄糖苷、甘草苷、橙皮苷和甘草酸对照品适量，用甲醇
          病毒DNA的复制及病毒相关蛋白的表达来发挥抗病毒                            制成质量浓度分别为 100.00、253.75、1 020.00、414.00
          作用，同时还能够通过调节多种炎症因子的表达，减少                            μg/mL 的混合对照品溶液Ⅰ。再用甲醇将上述混合对
          氧化应激引起的损伤来发挥抗炎作用 ；甘草苷具有镇                            照品溶液Ⅰ稀释至初始浓度的2/5、1/5、3/25、2/25、1/25、
                                           [6]
          咳祛痰的作用，可通过抑制脑内脂质过氧化和清除氧自                            1/50，得到混合对照品溶液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ。
                              [7]
          由基来提高抗氧化活性 。                                        2.1.2 供试品溶液 取芪桂苓合剂适量，加水稀释至初
              由于中药组方的复杂性，单一成分的含量测定并不                          始浓度的 1/10，以 14 000 r/min 离心 10 min，取上清液，
          能对整体复方进行质量控制，而中药指纹图谱能够较为                            即得。
                                                              2.2 指纹图谱的建立
          全面地反映制剂中化学成分的绝大部分信息。一测多
                                                              2.2.1 色谱条件 以 Inertsil ODS-3-C18 （250 mm×4.6
          评法是采用一个易得的对照品成分来实现多个成分的
                                                              mm，5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1% 甲酸溶液（B）为
          同时定量，可以解决部分对照品难以获得的问题。此方
                                                              流动相进行梯度洗脱（0～30 min，8%A→23%A；30～45
          法已在中药材及其制剂的质量评价、多成分定量分析方
                                                              min，23%A→35%A；45～60 min，35%A→60%A；60～65
          面广泛应用      [8―10] 。基于此，本研究采用高效液相色谱
                                                              min，60%A→90%A；65～70  min，90%A）；流 速 为 1.0
         （HPLC）法，以橙皮苷为参照峰，建立了 12 批芪桂苓合
                                                              mL/min；柱温为25 ℃；检测波长为254 nm；进样量为10
          剂的指纹图谱，进行相似度评价，并进行聚类分析、主成
                                                              μL。
          分分析和正交偏最小二乘法-判别分析；以橙皮苷为内
                                                              2.2.2 精密度试验 精密量取“2.1.2”项下供试品溶液
          参物，采用一测多评法测定芪桂苓合剂中毛蕊异黄酮葡
                                                             （编号 S1），按“2.2.1”项下色谱条件进样测定 6 次，以 12
          萄糖苷、甘草苷、甘草酸的含量，并与外标法的测定结果
                                                              号峰（橙皮苷，保留时间居中、分离度良好）为参照峰，计
          进行比较，以验证一测多评法的可靠性和准确性，旨在
                                                              算得各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.02%～0.61%
          为芪桂苓合剂多指标质量控制和评价提供参考。
                                                             （n＝6），相对峰面积的RSD 为0.42%～2.72%（n＝6），表
          1 材料
                                                              明方法精密度良好。
          1.1 主要仪器
                                                              2.2.3 重复性试验 精密量取芪桂苓合剂（编号S1），按
              本研究所用主要仪器包括 Agilent 1260 型 HPLC 仪
                                                             “2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液 6 份，再按“2.2.1”
         （美 国 Agilent 公 司），Shimadzu  LC-20A 型 HPLC 仪 、
                                                              项下色谱条件进样测定，以12号峰（橙皮苷）为参照峰，
          AUW-120D 型十万分之一天平（日本 Shimadzu 公司），
                                                              计算得各共有峰相对保留时间的RSD为0.05%～0.41%
          Milli-Q型纯水仪（美国Millipore公司），KQ-300E型超声              （n＝6），相对峰面积的RSD 为0.50%～3.53%（n＝6），表
          波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。                                 明方法重复性良好。
          1.2 主要药品与试剂                                         2.2.4 稳定性试验 取“2.1.2”项下同一供试品溶液（编
              芪桂苓合剂（批准号为豫药制备字 Z20200018000）                   号S1），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.2.1”
          由漯河市中心医院自制（编号S1～S12，对应批号分别为                         项下色谱条件进样测定，以12号峰（橙皮苷）为参照峰，
          20220402、20220408、20220411、20220413、20220415、       计算得各共有峰相对保留时间的RSD为0.08%～0.25%
          20220418、20220420、20220422、20220424、20220426、      （n＝6），相对峰面积的RSD 为0.51%～2.77%（n＝6），表
          20220428、20220506）；毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批                   明样品在室温下放置24 h内稳定性良好。
          号 111920-201907，纯度 97.6%）、甘草苷对照品（批号                 2.2.5 指纹图谱的建立及相似度评价 取 12 批芪桂苓
          111610-202209，纯度 93.1%）均购自中国食品药品检定                  合剂，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”
          研究院；甘草酸（批号 MUST-19052407，纯度 99.5%）、橙                项下色谱条件进样测定，记录色谱图，并导入《中药色谱
          皮苷对照品（批号 MUST-19030701，纯度 98.46%）均购                 指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》。以 S1 为参照图
          自成都曼思特生物科技有限公司；甲酸（批号20180412，                       谱（峰面积适中，色谱峰较多），采用中位数法，以0.1 min


          · 1224 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 10                            中国药房  2023年第34卷第10期
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