Page 60 - 《中国药房》2023年9期

2.2 干预措施 标记细胞在单位面积内的数目，取平均值进行定量分
[5]
取适量人工麝香按专利方法 制备土家族麝针（含 析。BrdU 标记的细胞数目越多，表明神经干细胞迁移
人工麝香3 mg）。参考文献[7]方法进行干预：麝针治疗 和分化的程度越显著。其中，BrdU 标记的细胞核呈红
组大鼠将麝针置于缺血区对侧头皮运动区肌层，以 20 色荧光；DCX 及 NeuN 标记的细胞质呈绿色荧光，细胞
r/min 持续捻针 5 min，直至针刺部位温度稍微上升后将 核呈蓝色荧光；DCX/BrdU 和 NeuN/BrdU 联合标记的细
针留置5 min，反复捻转留置3次后将针取出，每天干预2 胞质呈绿色荧光，细胞核呈红色荧光。
次。5 d为1个疗程，1个疗程结束后大鼠适应2 d再进入 2.7 大鼠血浆中HIF-1α、VEGF水平检测
下一个疗程，持续干预3个疗程。普通针刺组则采用传 采用 ELISA 法进行检测。取“2.5”项下各组大鼠腹
统毫针以相同的针刺方式和部位进行干预，假手术组和 主动脉血进行离心，取上清液，按 ELISA 试剂盒说明书
模型组不采取任何干预措施。第2个疗程开始后，各组 方法检测大鼠血浆中HIF-1α、VEGF水平。
大鼠同时参考文献[10]方法腹腔注射 BrdU 溶液（50 2.8 统计学方法
mg/kg），连续注射12 d，以完成BrdU增殖细胞在缺血侧 采用SPSS23.0软件进行分析，计量资料以x±s表示。
室管膜下区的标记（用以反映神经元的新生情况）。 多组间比较采用单因素方差分析；方差齐性时，组间两
2.3 大鼠神经功能缺损评分 两比较采用LSD-t检验，同组治疗前后比较采用配对t检
每组随机选择 6 只大鼠分别于干预前和末次干预 验；方差不齐时，采用Dunnett-t检验。检验水准α＝0.05。
24 h 后，采用改良神经功能缺损评分法评估其运动、感 3 结果
[11]
知、反射和平衡能力，并记录得分 。将各组大鼠得分 3.1 土家族麝针疗法对大鼠神经功能缺损的影响
取平均值作为最终得分，分值越高说明神经功能缺损程 治疗前，与假手术组比较，模型组、普通针刺组、麝
度越严重。 针治疗组大鼠神经功能缺损评分均显著升高（P＜
2.4 大鼠Morris水迷宫行为学测试 0.05）。治疗后，与模型组比较，麝针治疗组和普通针刺
以“2.3”项下参与经神经功能缺损评分的24只大鼠 组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）；与普
进行Morris水迷宫行为学实验。前5 d仅进行适应性训 通针刺组比较，麝针治疗组大鼠神经功能缺损评分显著
练，将大鼠面对池壁，先后从一、二、三、四象限的入水点 降低（P＜0.05）。另外，除假手术组外，其余各组与治疗
放入水面，观察并记载其在60 s内找到并爬上平台所用 前比较，大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）。
时间（即逃避潜伏期，时间越短说明大鼠空间记忆能力 结果见表1。
越强，反之越弱）、经过平台的次数及运动路线。若大鼠 表1 各组大鼠神经功能缺损评分结果（x±s，n＝6）
60 s 内无法找到平台，则人为将其指引至平台上，等待 组别 治疗前 治疗后
假手术组 0 0
10 s后放回笼中并记录其逃避潜伏期为60 s。第6天开
模型组 9.68±1.02 a 6.86±1.02 b
始进行空间探索实验，观察并记录大鼠在60 s内从不同 普通针刺组 9.37±0.85 a 4.11±0.60 bc
象限入水后找到平台的时间。 麝针治疗组 9.59±0.67 a 3.22±0.29 bcd
2.5 大鼠脑皮质区神经元形态观察 a：与治疗前假手术组比较，P＜0.05；b：与同组治疗前比较，P＜
0.05；c：与治疗后模型组比较，P＜0.05；d：与治疗后普通针刺组比较，
上述实验结束后，大鼠腹腔注射戊巴比妥钠进行麻
P＜0.05
醉，收集腹主动脉血备用；然后向大鼠心脏灌注生理盐
3.2 土家族麝针疗法对大鼠空间记忆能力的影响
水 200 mL，继续灌入 4% 多聚甲醛使其灌注充分，断头
与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期显著延
后将缺血损伤侧脑组织取出，迅速放入 4% 多聚甲醛中
长，通过平台次数显著减少（P＜0.05）；与模型组比较，
固定，然后进行尼氏染色并制成切片，利用光学显微镜
普通针灸组、麝针治疗组大鼠逃避潜伏期显著缩短，通
观察并拍照。
过平台次数显著增加（P＜0.05）；与普通针刺组比较，麝
2.6 大鼠缺血侧室管膜下区DCX/BrdU和NeuN/BrdU
针治疗组大鼠逃避潜伏期显著缩短，通过平台次数显著
联合标记细胞表达的检测
增加（P＜0.05）。结果见表2、图1。
采用免疫荧光染色法进行检测。切取部分脑组织
表2 各组大鼠逃避潜伏期、通过平台次数的检测结果
制作切片，经烤片、脱蜡、脱水后，用乙二胺四乙酸抗原 （x±s，n＝6）
进行修复，以盐酸孵育后用硼酸溶液漂洗，再以3%牛血
组别 逃避潜伏期/s 通过平台次数/次
清白蛋白室温密封；加入一抗（BrdU、DCX、NeuN 的稀 假手术组 11.60±1.38 5.75±1.45
释度均为 1∶100）、二抗孵育后，滴加 DAPI 染色液复染， 模型组 27.39±3.14 a 2.38±0.71 a
普通针刺组 20.48±1.41 b 4.08±1.25 b
避光孵育，以磷酸盐缓冲液冲洗切片，封片。采用显微
麝针治疗组 12.28±1.06 bc 5.13±1.03 bc
镜观察每张切片，找到BrdU标记的脑组织并随机选取5 a：与假手术组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与普通
个视野采集图像，通过Image Pro Plus 6.0软件获取联合 针刺组比较，P＜0.05

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