Page 59 - 《中国药房》2023年9期

ordinary acupuncture group （P＜0.05）； the neuronal structure was improved， and the number of Nissl bodies increased； the
number of DCX/BrdU and NeuN/BrdU co-labeled cells in the ischemic subependymal area were significantly increased （P＜0.05）；
the plasma levels of HIF-1α and VEGF were significantly increased （P＜0.05）. Compared with ordinary acupuncture group， the
plasma level of HIF-1α was reduced （the difference was not statistically significant）， while the level of VEGF was significantly
increased （P＜0.05）. CONCLUSIONS Tujia medicine musk needle therapy can significantly improve the cognitive dysfunction in
ischemic stroke model rats， and its mechanism of action may be associated with promoting migration and differentiation of neural
stem cell in ischemic subependymal area， preventing the excessive release of HIF-1α and increasing the expression of VEGF.
KEYWORDS ischemic stroke； Tujia medicine musk needle； cognitive dysfunction； neural stem cells； neurons

脑卒中起病急、进展快，疾病负担逐年上升 。缺血 大鼠 HIF-1α 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（批号
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性脑卒中在所有脑卒中类型中最为常见，约占 60% 。 BR20959）购自上海榕柏生物技术有限公司；大鼠VEGF
动脉粥样硬化介导脑血栓形成后导致的脑部缺血坏死 ELISA 试剂盒（批号 EK183-02）购自杭州联科生物技术
是缺血性脑卒中的主要发病机制，静脉溶栓是其主要治 有限公司；鼠源肾上腺双皮质激素（doublecortin，DCX；
疗手段，但其存在时间窗口，患者需要在发病后4.5 h内 其可反映神经干细胞的迁移情况）抗体、鼠源神经元核
进行静脉溶栓，否则效果大大降低，从而增加患者的病 抗原（neuron specific nuclear protein，NeuN；其可反映神
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死率 。患者缺血性脑卒中后常伴有血管性认知能力缺 经干细胞的分化情况）抗体、鼠源 5-溴-2-脱氧尿嘧啶核
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陷，预后自主生存能力也逐渐下降 ，因此，缺血性脑卒 苷（5-bromo-2-deoxy uridine，BrdU）抗体（批号分别为
中的早期预防和临床治疗成为目前亟待解决的难题。 4255S、4702S、2983T）均购自美国 CST 公司；异硫氰酸
土家族麝针疗法是恩施土家族地区治疗急暴症（如 荧光素（FITC）标记的山羊源免疫球蛋白 G（IgG）、FITC
缺血性脑卒中、惊厥、晕厥）的一种特殊外治疗法，是将 标记的山羊源IgG、CY3标记的驴源IgG二抗（批号分别
麝香放入香樟子挡门牙中，制成麝针以代替刀或针来刺 为GB131356、GB131460、GB131359）均购自武汉赛维尔
激穴位从而达到治疗目的，具有传统针灸疗法和药物治 生物科技有限公司；尼氏染色试剂盒（批号 SC2033）购
疗联合作用的优势。在前期研究中，本课题组根据土家 自北京中杉金桥生物技术有限公司；DAPI染色液（货号
族麝针的基本原理，研制出了其替代用针，并取得了相 ZKP-E15006-2）购自苏州泽科生物科技有限公司；其他
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关专利（授权号为ZL201720035406.2） 。 试剂均为分析纯。
本课题组前期研究发现，土家族麝针疗法可改善缺 1.3 实验动物
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血性脑卒中模型大鼠的认知能力 ，但是具体作用机制 本研究所用动物为 SPF 级 SD 雄性大鼠，共 44 只，
尚未完全阐明。有研究表明，机体在缺氧时可通过促进 5～7周龄，体质量（200±20） g，购自辽宁长生生物技术
缺氧诱导因子 1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α） 有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（辽）2015-0001。
的生成，启动血管内皮生长因子（vascular endothelial 大鼠饲养于温度 20 ℃、湿度 55%～75%、自然光照的环
growth factor，VEGF）的转录，致使 VEGF 表达增强，促 境中，其间自由饮食。本研究动物实验通过湖北民族大
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进缺氧的恢复 。基于此，本研究采用改良线栓法构建 学实验动物科学研究伦理审查，伦理批号为（2018）008。
缺血性脑卒中模型大鼠，并通过检测 HIF-1α、VEGF 的 2 方法
水平，研究土家族麝针疗法对模型大鼠认知能力缺陷的 2.1 分组与造模
改善作用及机制，以期为土家族麝针的临床应用提供 将 44 只大鼠随机分成假手术组、模型组、普通针刺
参考。 组、麝针治疗组，每组11只。除假手术组外，其余各组大
1 材料 鼠采用改良线栓法并参考本课题组前期研究 构建缺血
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1.1 主要仪器 性脑卒中模型。具体方法如下：将大鼠麻醉后，从颈前
本研究所用主要仪器有 DMS-2 型 Morris 水迷宫测 正中纵形切口分离出左侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动
试系统（中国医学科学院药物研究所），ECLIPSE E100 脉，以微型动脉夹结扎颈总动脉、颈内动脉；在颈总动脉
型正置光学显微镜、ECLIPSE TI-SR型荧光显微镜（日本 距颈内动脉分叉 2～3 mm 处剪开一“V”形口，松开微型
Nikon 公司），5810R 型高速冷冻离心机（德国 Eppendorf 动脉夹；将线栓从颈总动脉逐渐插入到颈内动脉，继续
公司），1530 型酶标定量测定仪（美国 Thermo Fisher 向下推进约18 mm，缝合肌肉与皮肤。假手术组大鼠将
Scientific公司），Enspire型多功能酶标仪（美国Perkinelmer 颈总动脉暴露充分并与其他组织结构分离，但不行栓塞
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公司），Milli-QIQ-7000型超纯水仪（美国Millipore公司）。 处理。按照 Zea-Longa 5 级评分法 筛选出评分为 1～3
1.2 主要药品与试剂 分的大鼠，即造模成功的大鼠。各组均死亡1只大鼠，且
土家族麝针由本实验室自制，麝香的含量为3 mg/支； 除假手术组外，其余各组大鼠均造模成功。

中国药房 2023年第34卷第9期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 9 · 1077 ·