Page 65 - 《中国药房》2023年9期

2.3 指纹图谱的建立 100
80
2.3.1 精密度试验 吸取“2.1.2”项下供试品溶液（编号 U/mV 60 2 5
40
S1）适量，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，每次10 μL。 20 0 8 15
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
以2号峰为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间和相 t/min
对峰面积的RSD均小于3%，表明该方法精密度良好。 A.混合对照品溶液
2.3.2 重复性试验 称取马齿苋药材样品粉末（编号 100
80
S1）适量，共6份，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶 U/mV 60
40
20 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，每次10 μL。以2号 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
峰为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面 t/min
B.供试品溶液
积的RSD均小于3%，表明该方法重复性良好。
2：咖啡酸；5：阿魏酸；8：染料木苷；15：槲皮素
2.3.3 稳定性试验 取同一份供试品溶液（编号S1），分 图 2 混合对照品和马齿苋药材样品的HPLC图
别在室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.2”项下色谱条
表2 咖啡酸等4种成分的线性关系考察结果
件进样测定，每次10 μL。以2号峰为参照峰，计算得各
成分 回归方程 R 2 线性范围/（mg/mL）
共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3%， 咖啡酸 Y＝7 501 218.520 9X+8 912.215 5 0.999 9 0.003 1～0.157 1
表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 阿魏酸 Y＝4 909 960.294 8X+5 068.604 7 0.999 9 0.003 6～0.181 7
染料木苷 Y＝1 384 380.520 0X+1 138.226 9 0.999 7 0.008 5～0.425 6
2.3.4 共有峰的标定、指认及相似度评价 取15批马齿
槲皮素 Y＝42 918 347.617 7X+6 163.489 3 0.999 9 0.000 4～0.021 8
苋药材样品，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，
2.4.2 精密度试验 精密吸取“2.1.1”项下混合对照品
按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，并将15份
溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰
色谱图以CDF格式导入《中药色谱指纹图谱相似度评价
面积。结果显示，咖啡酸、阿魏酸、染料木苷、槲皮素峰
系统（2012版）》软件中。将编号S1样品的HPLC图设为
面积的RSD分别为1.58%、1.67%、1.36%、1.20%（n＝6），
参照图谱，设置时间窗宽度为 0.1 min，利用中位数法生
表明仪器精密度良好。
成对照图谱，总共标定出 17 个共有峰（图 1）；再通过与
2.4.3 重复性试验 精密称取同一批马齿苋药材样品
混合对照品溶液的色谱图进行比对，指认出其中的4个
粉末（编号S1）6份，每份20 g，分别按“2.1.2”项下方法制
共有峰（图 2），其中 2 号峰为咖啡酸（参照峰），5 号峰为 备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰
阿魏酸，8号峰为染料木苷，15号峰为槲皮素。将对照图 面积，并采用外标法计算各成分的含量。结果显示，咖啡
谱与15批药材样品的HPLC图进行相似度分析，结果显 酸、阿魏酸、染料木苷、槲皮素的平均含量分别为0.022 3、
示，15批药材样品的相似度均大于0.890，表明不同产地 0.037 8、0.043 9、0.000 9 mg/g，RSD 分 别 为 1.93%、
马齿苋药材中化学成分的种类差异较小。 2.39%、2.46%、2.92%（n＝6），说明该方法重复性良好。
13 14
1 2（S） 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 15 1617 2.4.4 稳定性试验 取同一供试品溶液（编号S1），分别
R
700 S15
S14 在室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.2”项下色谱条件
600 S13
S12 进样测定，记录峰面积。结果显示，咖啡酸、阿魏酸、染
500 S11
S10 料木苷、槲皮素峰面积的 RSD 分别为 1.92%、2.08%、
S9
400
U/mV 300 S8 2.02%、1.66%（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置24 h
S7
S6
200 S5 内的稳定性良好。
S4
100 S3
S2 2.4.5 加样回收率试验 称取已知成分含量的马齿苋
0 S1
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 药材样品粉末（编号 S1）9 份，每份 10 g，精密称定，分别
t/min 按低、中、高质量浓度加入单一对照品溶液，每个质量浓
R：对照图谱
度 3 份，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，按“2.2”项
图1 15批马齿苋药材样品的HPLC指纹图谱和对照图谱
下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果显示，咖
2.4 HPLC含量测定法的建立 啡酸、阿魏酸、染料木苷、槲皮素的平均加样回收率分别为
2.4.1 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项下混合对照 102.34%、101.18%、100.98%、101.80%，RSD分别为1.63%、
品溶液，用甲醇稀释制成不同质量浓度梯度的混合对照 1.91%、2.53%、2.15%（n＝3），表明该方法准确度良好。
品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，每次10 μL，记 2.5 一测多评法的建立
录峰面积。以峰面积为纵坐标（Y）、对照品的质量浓度 2.5.1 相对校正因子的计算 精密吸取“2.1.1”项下混
为横坐标（X）绘制标准曲线，得到咖啡酸等 4 种成分的 合对照品溶液，分别按“2.2”项下色谱条件进样 1、3、5、
线性回归方程，见表2。 10、15、20 μL，记录峰面积。以咖啡酸为内标物，按文献

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