Page 54 - 《中国药房》2023年9期
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一电子天平（瑞士Mettler Toledo公司），TDL-80-2C型低               2.131 0 mg/g，RSD 分别为 1.62%、1.37%（n＝6），表明该
          速离心机（上海安亭科学仪器有限公司）。                                 方法重复性良好。
          1.2 药物与试剂                                           2.1.8 加样回收率试验 精密称取已知迷迭香酸、异嗪
              肿节风药材为本课题组野外采集，经自然阴干后密                          皮啶含量的肿节风药材粉末 0.5 g，共 6 份，分别精密加
          封保存，经江西中医药大学药学院刘勇教授鉴定为金粟                            入一定量混合对照品溶液，按“2.1.3”项下方法制备供试
          兰科植物草珊瑚 S. glabra （Thunb.） Nakai 的干燥全草。             品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，
          迷迭香酸对照品（批号 111871-202007，纯度＞98%）、异                  计算加样回收率。结果显示，迷迭香酸、异嗪皮啶的平
          嗪皮啶对照品（批号 110837-201608，纯度 100%）均购自                 均加样回收率分别为 99.76%、101.42%，RSD 分别为
          中国食品药品检定研究院；乙腈、磷酸为色谱纯，甲醇为                           1.09%、0.89%（n＝6），表明该方法准确可行。
          分析纯，水为娃哈哈纯净水。                                       2.2 肿节风药材中迷迭香酸、异嗪皮啶提取参数的单因
          2 方法与结果                                             素考察实验
          2.1 肿节风药材中迷迭香酸、异嗪皮啶含量测定方法的                              精密称取肿节风药材粉末 0.5 g，考察超声时间、超
          建立                                                  声温度、液料比（mL/g）、甲醇体积分数对迷迭香酸、异嗪
          2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent ZORBAX Eclipse              皮啶提取的影响，按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶
          XDB-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%            液，按照“2.1.1”项下色谱条件进行分析。
          磷 酸 溶 液（20∶80，V/V）；流 速 为 1.0  mL/min；柱 温 为          2.2.1 超声时间考察 在甲醇体积分数 100%、液料比
          35 ℃；检测波长为342 nm；进样量为10 μL。                         50∶1（mL/g）、超声温度45 ℃条件下，按“2.1.1”项下色谱
                                                              条件分别考察超声时间 20、30、40、50、60 min 对迷迭香
          2.1.2 对照品溶液的制备 分别精密称定迷迭香酸4 mg、
                                                              酸、异嗪皮啶含量的影响。由图1A可知，随着超声时间
          异嗪皮啶3.5 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀
          释至刻度，即得迷迭香酸、异嗪皮啶质量浓度分别为                             的延长，迷迭香酸的含量逐渐升高，在 20～40 min 内增
                                                              长幅度较大，在 40～60 min 内增长幅度较小；异嗪皮啶
          0.8、0.7 mg/mL的单一对照品溶液。精密吸取各单一对
                                                              含量随超声时间的延长呈先升高后降低的趋势，但变化
          照品溶液1 mL，置于5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释
                                                              范围较小，在40 min附近达到最大值。经综合考虑后，选
          至刻度，即得混合对照品溶液。
                                                              择超声时间30～50 min进行Box-Behnken响应面实验。
          2.1.3 供试品溶液的制备 精密称定肿节风药材粉末
          0.5 g（过三号筛），置于具塞锥形瓶中，加入一定体积分                          2.5                      2.5
          数甲醇25 mL，密塞，称定质量；在一定条件下超声提取，
                                                                                迷迭香酸
          放冷，再称定质量；用相同体积分数甲醇补足减失的质                              2.0                      2.0             迷迭香酸
          量，摇匀，以13 000 r/min 离心10 min，经0.45 μm微孔滤              （ mg/g ）         异嗪皮啶    （ mg/g ）         异嗪皮啶
          膜滤过，取续滤液，即得。                                         含量/                      含量/
          2.1.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 2、4、                         1.5                      1.5
          6、8、10 μL 进样分析，以峰面积（Y）为纵坐标，以进样量
         （X/μg） 为横坐标，绘制标准曲线。结果显示，迷迭香酸                           1.0                      1.0
                                                                   20   30   40   50   60   70  25   35   45   55   65
          与异嗪皮啶的回归方程分别为 Y＝2 492 576.666 7X－                             超声时间/min                 超声温度/℃
                         2
          904  910.333  3（R ＝0.999  6）、Y＝3  209  458.244  9X－           A.超声时间                  B.超声温度
                          2
          1 324 374.200 0（R ＝0.999 6），线性范围分别为 0.32～                                                    迷迭香酸
          1.60、0.28～1.40 μg。                                    2.5                      2.5           异嗪皮啶
          2.1.5 精密度试验 取混合对照品溶液适量，按“2.1.1”                                        迷迭香酸
                                                                2.0              异嗪皮啶
          项下色谱条件连续进样6次，记录各成分峰面积。结果                                                      （ mg/g ）  2.0
          显示，迷迭香酸、异嗪皮啶峰面积的RSD分别为1.82%、                         （ mg/g ）  1.5
          0.87%（n＝6），表明仪器精密度良好。                                含量/  1.0                 含量/  1.5
          2.1.6 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液于室温                        0.5
          放置 0、2、4、8、12、24 h 时，按“2.1.1”项下色谱条件进样                  0                       1.0
                                                                  0             20           40             60          80  55      65       75      85          95       105
          分析，记录峰面积。结果显示，迷迭香酸、异嗪皮啶峰面                                    液料比/（mL/g）              甲醇体积分数/%
          积的RSD分别为1.01%、1.27%（n＝6），表明供试品溶液                              C.液料比                 D.甲醇体积分数
                                                                          图 1 单因素实验考察结果
          在室温放置24 h内稳定。
          2.1.7 重复性试验 取肿节风药材粉末 0.5 g，共 6 份，                   2.2.2 超声温度考察 在甲醇体积分数 100%、液料比
          分别按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下                    50∶1（mL/g）、超声时间 40 min 条件下，按“2.1.1”项下色
          色谱条件进样测定，记录峰面积，按外标法计算含量。                            谱条件分别考察超声温度30、40、45、50、60 ℃对迷迭香
          结果显示，迷迭香酸、异嗪皮啶的平均含量分别为5.102 2、                      酸、异嗪皮啶含量的影响。由图1B可知，随着超声温度


          · 1072 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9                              中国药房  2023年第34卷第9期
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