Page 49 - 《中国药房》2023年9期
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SB203580  group）  was  increased  significantly （P＜0.05）；  protein  expressions  of  IL-1β  was  reduced  significantly  in ASMCs （P＜
          0.05）.  ASMCs  absorbance  values  and  protein  expressions  of  α -SMA，  SOCS1，  p38  MAPK  and  p-p38  MAPK  were  increased
          significantly in SOCS1-RNAi group （P＜0.05）. CONCLUSIONS Rhy-SLN can inhibit the proliferation of ASMCs， the mechanism
          of which may be associated with overexpression of SOCS1 and inhibiting the protein expressions of IL-1β and p38 MAPK.
          KEYWORDS    rhynchophylline solid lipid nanoparticles； airway smooth muscle cells； asthma； α-smooth muscle actin； interleukin-
          1β； recombinant suppressors of cytokine signaling 1； p38 mitogen-activated protein kinase


              支气管哮喘是一类以可逆的气流阻塞、气道炎症反                         宝科技有限公司；胎牛血清（批号 FCS500）购自上海吉
          应及气道重塑为特征的慢性呼吸道疾病，可严重危害人                           泰依科赛生物科技有限公司；磷酸盐缓冲液（PBS）、
          类健康   [1―2] 。据统计，目前全球哮喘患者约有 3 亿人，少                 MTT 试剂盒、兔源磷酸化 p38 MAPK（p-p38 MAPK）单
                                    [3]
          数国家哮喘的患病率高达 18% 。有关研究表明，受环                         克隆抗体（批号分别为 G4202、G4101、GB113380）均购
          境中的过敏原影响，哮喘发作会激发气道中淋巴细胞及                           自武汉赛维尔生物科技有限公司；兔源SOCS1单克隆抗
          嗜酸性粒细胞的分泌活性，诱导炎症反应并刺激气道平                           体、兔源 p38 MAPK 单克隆抗体（批号分别为 A7754、
                                                       [4]
          滑肌细胞（airway smooth muscle cell，ASMCs）的增殖 。         A5049）均购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；兔源
          如何缓解 AMSCs 的增殖肥大，已经成为治疗哮喘的关                        IL-1β 单克隆抗体、兔源 α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth
          键问题。                                               muscle  actin，α -SMA）单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为 bs-
              钩藤碱为中药钩藤的主要有效成分，其可通过抑制                         0812R、bms-52392R）均购自北京博奥森生物技术有限
          血管平滑肌中的钙离子通道诱导血管舒张，同时抑制血                           公司；兔源 β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（批号 TA-
                        [5]
          管平滑肌的增殖 。研究发现，钩藤碱对哮喘模型大鼠                           09）购自北京中杉金桥生物有限公司；TRNzol Universal
                            [6]
          具有一定的平喘作用 。本课题组前期制备了钩藤碱固                           总 RNA 提取试剂、FastQuant cDNA 第一链合成试剂盒
          体脂质纳米粒（rhynchophylline solid lipid nanoparticles，  （批号分别为 DP424、KR116）均购自北京天根生化科技
          Rhy-SLN），并发现其可通过抑制 AMSCs 增殖，发挥平                    有限公司；Lipofectamine 3000 试剂盒（批号 L300015）购
                [7]
          喘作用 ，但具体的作用机制尚未完全明确。白细胞介                           自美国 Invitrogen 公司；辣根过氧化物酶标记的免疫球
          素 1β（interleukin-1β，IL-1β）与 ASMCs 的增殖密切相           蛋白 G 二抗（批号 LS0500）购自上海源叶生物科技有限
            [8]
          关 ，过表达的IL-1β能够影响细胞因子信号转导抑制蛋                        公司。
          白 1（recombinant  suppressors  of  cytokine  signaling  1，  1.3 动物
          SOCS1）诱 导 的 p38 丝 裂 原 激 活 的 蛋 白 激 酶（p38                本研究所用动物为BALB/c雌性小鼠，共10只，5周
          mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）的磷酸化，    龄，体质量 18～24 g，购自北京维通利华实验动物技术
          从而影响 ASMCs 增殖      [9―11] 。基于此，本研究通过检测             公司，动物生产许可证号为SCXK（京）2021-0011。小鼠
          ASMCs 中 IL-1β、SOCS1、p38 MAPK 蛋白的表达情况，              饲养于济宁医学院动物中心，饲养温度为20～23 ℃，相
          进一步阐明Rhy-SLN抑制哮喘的具体作用机制，以期为                        对湿度为 40%～70%，在此期间自由进食、饮水，昼夜节
          哮喘药物的开发提供参考。                                       律正常。本研究动物实验经济宁市第一人民医院动物
          1 材料                                               伦理委员会审核批准，批准号为JNMC-2022-YX-021。
          1.1 主要仪器                                           2 方法
              本研究所用主要仪器包括BPN-80CH型CO2培养箱                     2.1 Rhy-SLN的制备
         （上海一恒科学仪器有限公司）；SW-CJ-1FD型超净工作                           参考本课题组前期研究方法，精密称取处方量的钩
          台（苏州安泰空气技术有限公司）；CKX53型倒置荧光显                        藤碱、脂质、卵磷脂等，采用纳米乳法制备 Rhy-SLN（钩
                                                                                  [7]
          微镜（日本Olympus公司）；CMAX PLUS型酶标仪（美国                   藤碱的载药量为3.52%） ，并于4 ℃密封保存备用。
          Molecular Devices公司）；JY04S-3C型凝胶成像系统（北             2.2 哮喘模型小鼠的构建
          京君意东方电泳设备有限公司）；LightCycler96 型荧光                       将小鼠随机分为正常组和造模组，每组各 5 只。造
          定量聚合酶链式反应（PCR）仪（瑞士Roche公司）                         模组小鼠参考文献[7]方法，采用卵清蛋白+氢氧化铝过
          1.2 主要药品与试剂                                        敏法建立哮喘模型，具体方法如下：小鼠分别在第 0、14、
              钩藤碱（纯度 98%）、p38 MAPK 信号通路抑制剂                   28、42 天皮下注射卵清蛋白+氢氧化铝溶液（20 µg 卵清
          SB203580（批号分别为 R102720、S125924）均购自上海               蛋白和 1 mg 氢氧化铝溶于 200 µL PBS 中备用）；在第
          阿 拉 丁 生 化 科 技 有 限 公 司 ；DMEM 培 养 基（批 号              21～42 天，小鼠雾化吸入卵清蛋白+氢氧化铝溶液进行
          CM15019）购自中科迈晨（北京）科技有限公司；胰酶、                       致敏，每次雾化30 min，每周3次。正常组小鼠不做任何
          DAPI 染液（批号分别为 T1300、C0060）均购自北京索莱                  处理。末次给药后，腹腔注射戊巴比妥钠（200 mg/kg）处


          中国药房  2023年第34卷第9期                                                China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9    · 1067 ·
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