Page 43 - 《中国药房》2023年9期
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wall thickening in model group； the apoptotic rate of pulmonary epithelial cells，mRNA expressions of RIPK1， RIPK3 and MLKL，
          protein  expressions  of  RIPK1，  RIPK3  and  p-MLKL  were  increased  significantly （P＜0.05）.  Compared  with  model  group，  above
          indexes  of  rats  were  improved  significantly  in  Wog  low-dose  and  high-dose  groups （P＜0.05），  and  pathological  injuries  were
          alleviated significantly. The corresponding indexes of rats were worsened in rRIPK1 group （P＜0.05）， and pathological damage had
          further worsened. rRIPK1 significantly attenuated the inhibitory effect of high-dose Wog on airway inflammation and RIPK1/RIPK3/
          MLKL  pathway  in  COPD  rats （P＜0.05）.  CONCLUSIONS  Wog  may  improve  airway  inflammation  in  COPD  rats  by  inhibiting
          RIPK1/RIPK3/MLKL signal pathway.
          KEYWORDS    wogonin；  chronic  obstructive  pulmonary  disease；  airway  inflammation；  receptor-interacting  protein  kinase  1；
          receptor-interacting protein kinase 3； mixed lineage kinase domain-like protein


              慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary         1.2 主要药品与试剂
          disease，COPD）是一种慢性呼吸道疾病，由于气道和肺                         Wog 对照品（批号 20210609，纯度≥98%）、氨茶碱
          部的长期炎症，气道结构发生重塑，通常表现为持续的                           对照品（批号20221125，纯度≥90%）均购自上海晅科生
          气流受限和呼吸道症状，严重影响COPD患者的生活质                          物 科 技 有 限 公 司 ；重 组 大 鼠 RIPK1（recombinant  rat
                      [1]
          量和身体健康 。虽然有皮质类固醇、长效毒蕈碱拮抗                           RIPK1，rRIPK1，即RIPK1激活剂）购自武汉华美生物工
          药、长效 β2受体激动剂等治疗药物，但其只能提供短期                         程有限公司；大鼠白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、
                                     [2]
          益处，并不能阻止 COPD 的进展 。越来越多的证据表                        IL-6、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）
          明，COPD的核心特征是炎症，炎症会导致肺部不同部位                         酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒均购自武汉菲恩生
                    [3]
          的病理变化 。因此，开发新的药物来治疗 COPD 的气                        物科技有限公司；兔源 RIPK1 一抗（批号 ab300617）、
          道炎症具有重要意义。                                         RIPK3 一 抗（批 号 ab286151）、p-MLKL 一 抗（批 号
              汉黄芩素（wogonin，Wog）是一种从黄芩根中分离
                                                             ab208910）、MLKL一抗（批号ab243142）、甘油醛-3-磷酸
                                                       [4]
          出来的类黄酮物质，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡等活性 。
                                                             脱氢酶（GAPDH）一抗（批号ab8245）及辣根过氧化物酶
          已有研究报道，Wog 可抑制脂多糖（lipopolysaccharide，
                                                            （HRP）标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号 ab6721）均购自
          LPS）诱导的肺上皮细胞炎症和细胞凋亡，进而发挥对急
                                                             英国Abcam公司。
                            [5]
          性肺损伤的保护作用 。然而关于Wog对COPD过程中
                                                             1.3 动物
          气道炎症的影响鲜有报道。受体相互作用蛋白激酶 1
                                                                 本研究所用动物为 SPF 级雄性 SD 大鼠，共 84 只，7
         （receptor-interacting protein kinase 1，RIPK1）可与RIPK3
                                                             周龄，体质量 250～260 g，购自遵义医科大学实验动物
          相互作用并使混合系激酶区域样蛋白（mixed lineage
                                                             中心，动物生产许可证号为SCXK（黔）2021-0002。大鼠
          kinase  domain-like  protein，MLKL）磷 酸 化 ，磷 酸 化 的
                                                             饲养于相对湿度为 50%～60%，温度为 18～22 ℃，12 h
          MLKL（p-MLKL）会形成寡聚体并转移到质膜，从而破
                                                             昼夜交替的环境中，饲养期间可自由进食、饮水。本研
                                         [6]
          坏膜的完整性，促进炎症因子的释放 。相关研究显示，
                                                             究经遵义医科大学动物伦理委员会批准（批准号为
          RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路的激活可加剧急性呼吸
                                                             ZMU21-2105-105）。
                                        [7]
          窘迫综合征大鼠的肺组织病理损伤 。而Wog能否通过
                                                             2 方法
          调控 RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路影响 COPD 大鼠气
          道炎症尚不明确。本研究主要通过烟熏联合气管注射                            2.1 COPD大鼠模型的构建
          LPS的方法构建COPD模型来探究Wog对COPD大鼠气                           采用烟熏联合气管注射 LPS 的方式构建 COPD 大
                                                                   [8]
          道炎症的影响，并从RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路角度                    鼠模型 。将大鼠置于烟熏箱中，持续烟熏20 min，每日
          探讨其可能的作用机制，为Wog治疗COPD提供参考。                         3 次，连续 12 周，分别在烟熏第 1、70 天通过大鼠气管注
          1 材料                                               射 0.2 g LPS。通过观察各组大鼠肺功能指标及肺组织
                                                                                       [9]
          1.1 主要仪器                                           病理变化来评估造模是否成功 。
              本研究所用的主要仪器有：大鼠烟熏箱（上海玉研                         2.2 动物分组与给药
          科学仪器有限公司）、Pclab-430C 型生物信号采集系统                         将 84 只大鼠按随机数字表法分为对照组，模型组，
                                                                                                   [10]
          呼吸传感器（北京北瑞未来分析仪器有限公司）、ST-960                       Wog 低、高剂量组（灌胃给药，50、100 mg/kg ），氨茶碱
                                                                                           [11]
          型酶标仪（上海科华实验系统有限公司）、BX53 型光学                        组（阳性对照，灌胃给药，2.3 mg/kg ），rRIPK1 组（尾静
                                                                               [12]
          显微镜（日本Olympus公司）、ABI 7900型荧光定量PCR                  脉注射给药，8 µg/kg ），Wog 高剂量+rRIPK1 组（灌胃
          仪（美国 ABI 公司 ）、DYCZ-24DH 型双板垂直电泳仪                   100 mg/kg Wog 并尾静脉注射 8 µg/kg rRIPK1），每组 12
         （北京六一仪器厂）。                                          只。除对照组外，其余各组大鼠均按“2.1”项下方法构建


          中国药房  2023年第34卷第9期                                                China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 9    · 1061 ·
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