Page 26 - 《中国药房》2023年5期
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with blank group， serum levels of ALT， AST， TBI， IL-6， TNF-α and IL-1β and positive expressions of NF-κB and Grp78 in liver
          tissue  as  well  as  protein  expressions  of  Grp78，  CHOP， ATF6  and  IRE1α，  PERK  protein  phosphorylation  level  were  all  increased
          significantly  in  model  group （P＜0.05），  while  the  serum  level  of  TP  was  decreased  significantly （P＜0.05）.  The  disordered
          structure  of  liver  lobule，  swollen  liver  cells，  unclear  intercellular  boundary  were  observed  and  accompanied  by  inflammatory  cell
          infiltration. Compared with model group， most of the above indexes were significantly reversed in caudatin groups （P＜0.05）； the
          structure  of  hepatic  lobule  was  relatively  complete  and  clear，  the  cells  were  arranged  orderly，  and  the  infiltration  of  inflammatory
          cells  was  also  reduced.  CONCLUSIONS  Caudatin  has  a  significant  improvement  effect  against  DEN-induced  liver  injury  in  rats，
          the mechanism of which may be associated with inhibiting endoplasmic reticulum stress and inflammatory reaction.
          KEYWORDS     endoplasmic reticulum stress； caudatin； inflammation； liver injury； diethylnitrosamine



              肝脏承担多种生理机能，其良好的生理状态是维持                          1 材料
          机体健康的重要保证。病毒、药物、代谢异常及环境因                            1.1 主要仪器
                                  [1]
          素等都容易使肝脏受到损伤 。药物性肝损伤是引发急                                7020  型 自 动 生 化 分 析 仪 购 自 日 立 株 式 会 社 ；
          性肝功能衰竭的主要原因，据估计中国药物性肝损伤的                            Thermo  MicroCL21 型 冷 冻 离 心 机 购 自 美 国 Thermo
                                         [2]
          发病率大约为每10万人就有23.8例 。目前，导致肝损                         Fisher Scientific 公司；Milli-Q 型纯水机购自美国 Milli‐
          伤的原因多样且机制复杂，尚缺乏特异性的治疗药物。                            pore公司；IX73型倒置荧光显微镜购自日本Olympus公
          因此，寻找防治肝损伤的有效药物迫在眉睫。                                司 ；PECTERAMAX190 型 酶 标 仪 购 自 美 国 Molecular
              内质网内环境稳定是实现内质网功能的基本条件。                          Devices  公 司 ；PowerPac 型 通 用 电 泳 仪 和 Mini-
                                                                       ®
          内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERs） 是指细         PROTEAN  Tetra cell 型垂直电泳转印系统购自美国
          胞受内外因素刺激下，内质网形态与功能的平衡状态受                            Bio-Rad 公司；Tanon-5200 型化学发光凝胶成像系统购
          到破坏，蛋白质加工和运输受阻，内质网内累积了大量                            自上海天能科技有限公司。
                                 [3]
          未折叠或错误折叠蛋白质 。ERs 已成为药物性肝损                           1.2 药物与试剂
          伤、肝功能衰竭、病毒性肝炎、胰岛素抵抗、脂肪肝、脂肪                              告达庭、牛血清白蛋白、DEN、羧甲基纤维素钠购自
          性肝炎的重要发病机制，对增加肝癌风险具有重要                              美 国 Sigma 公 司（批 号 分 别 为 PHL89596、SRE009、
              [4]
          影响 。                                                N0258、C9481）；大鼠肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis
              白首乌为萝藦科植物大根牛皮消 Cynanchum au‐                    factor-α，TNF-α）、白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）酶联
          riculatum Royle ex Wight 的块根，具有滋补肝肾、强壮身             免疫吸附试验（enzyme-linked immunoadsordent assay，
          体、养血补血等功效         [5―6] 。C21甾苷类成分为白首乌的活             ELISA）试剂盒购自美国 Biolegend 公司（批号分别为
          性成分，具有保肝、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性                      [7―8] ，  438207、437107）；IL-1β ELISA 试剂盒购自美国 R&D
          已有研究报道其保肝作用与减轻氧化应激、抑制核因子                            Systems 公司（批号RLB00）；蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制
                                                       [5,9]
          κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号通路激活有关 。               剂购自美国 Med Chem Express 公司（批号分别为 HY-
          ERs 与氧化应激之间关系密切，ERs 可直接促进内质网                        K0010、HY-K0013 ）；RIPA 裂解液、BCA 蛋白定量试剂
          中活性氧（reactive oxygen species，ROS）的合成，从而导            盒购自上海碧云天生物技术有限公司（批号分别为
                  [10]
          致肝损伤 。告达庭是分离自白首乌的C21甾体苷元（化                          P0013B、P0010）；ECL 化学发光显色液购自南京诺唯赞
                                                              生物科技股份有限公司（批号E412-01/02）；兔源78 kDa
          学结构式见图1），其是否可通过抑制内质网应激减轻肝
                                                              葡糖调节蛋白（78-kD glucose-regulated protein，Grp78）
          损伤尚不明确。基于此，本研究采用二乙基亚硝胺
                                                              单克隆抗体、兔源肌醇需求激酶1α（inositol-requiring en‐
         （diethylnitrosamine，DEN）诱导肝损伤模型大鼠，探讨告
                                                              zyme-1α，IRE1α）单克隆抗体、兔源蛋白激酶 R 样内质
          达庭对肝损伤的改善作用机制，以期为告达庭的临床应
                                                              网激酶（protein kinase R-like ER kinase，PERK）单克隆抗
          用提供实验依据。
                                                              体、兔源 NF-κB 单克隆抗体、兔源 β-肌动蛋白（β-actin）
                                                              单克隆抗体、C/EBP 同源蛋白（C/EBP homologouspro‐
                                                              tein，CHOP）单克隆抗体（批号分别为 3177S、3294T、
                                                              5683T、8242S、93473SF）均购自美国Cell Signaling Tech‐
                                                              nology公司；兔源磷酸化PERK（p-PERK）单克隆抗体购
                      图1 告达庭的化学结构式                            自美国Abcam公司（批号ab192591）；辣根过氧化物酶标


          · 532 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 5                               中国药房  2023年第34卷第5期
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