Page 78 - 《中国药房》2023年3期

表3 响应面实验方差分析结果 2.5 Y/%
1.3
因素 平方和 自由度 均方 F P 1.2 2.3
模型 0.210 9 0.024 7.48 ＜0.01 Y/% 1.1
1.0
A 0.048 1 0.048 15.03 ＜0.01 0.9 B/h 2.1
B 3.828×10 －3 1 3.828×10 －3 1.21 0.308 5 0.8 1.9
0.7
C 0.015 1 0.015 4.63 0.068 4 1.7
2.5
AB 6.760×10 －4 1 6.760×10 －4 0.21 0.658 5 2.3 80
2.1 75 1.5
AC 4.000×10 －4 1 4.000×10 －4 0.13 0.733 1 B/h 1.9 1.7 65 70 60 65 70 75 80
BC 9.506×10 －3 1 9.506×10 －3 2.99 0.127 2 1.5 60 A/% A/%
A 2 0.091 1 0.091 28.68 ＜0.01 a.因素A与B交互作用的响应面图 b.因素A与B交互作用的等高线图
B 2 6.024×10 －3 1 6.024×10 －3 1.90 0.210 8 Y/%
1∶50
C 2 0.029 1 0.029 9.21 0.0190 1.3
残差 0.022 7 3.175×10 －3 1.2 1∶45
失拟项 0.015 3 4.948×10 －3 2.68 0.182 4 Y/% 1.1
1.0
纯误差 7.385×10 －3 4 1.846×10 －3 0.9 （ g/mL ） 1∶40
0.8
总和 0.240 16 0.7 C/
1∶35
利用 Design Expert 8.0.6 软件对实验结果进行回归 1∶50 80
1∶45 75 1∶30
1∶40 70
拟合分析，得到回归方程为 Y＝1.160+0.077A+0.022B+ C/（g/mL） 1∶35 65 60 65 70 75 80
1∶30 60 A/% A/%
2
2
0.043C+0.013AB+0.01AC－0.049BC－0.15A －0.038B － c.因素A与C交互作用的响应面图 d.因素A与C交互作用的等高线图
2
0.083C 。由表 3 可知，失拟项 P＝0.182 4＞0.05，表明 Y/%
1.3 1∶50
失拟不显著，即该模型对本实验拟合程度良好；R ＝ 1.2 1∶45
2
0.905 8，说明石胡荽总三萜提取率的变化有 90.58% 来 Y/% 1.1
1.0
0.9 （ g/mL ） 1∶40
自所选的因素。因此，因素A、B、C对石胡荽总三萜提取 0.8
0.7 C/
率影响主次顺序为：A＞C＞B，即乙醇体积分数＞料液 1∶35
1∶50 2.5
比＞提取时间。 1∶45 1∶40 2.1 2.3 1∶30
1∶35 1.7 1.9 1.5 1.7 1.9 2.1 2.3 2.5
C/（g/mL） 1∶30 1.5 B/h
在其他因素不变的情况下，选取 2 个交互因素对石 B/h
e.因素B与C交互作用的响应面图 f.因素B与C交互作用的等高线图
胡荽总三萜提取率进行响应面分析，利用Design Expert
图2 各因素交互作用对石胡荽总三萜提取率影响的响
8.0.6 软件绘制响应面图和等高线图（图 2）。结果显示，
应面图和等高线图
A 与 C 的交互作用显著，即这 2 个因素的交互作用对石
胡荽总三萜提取率的影响显著。 亚砜溶解，备用。
2.7 最佳制备工艺的确定与验证 2.8.2 不同萃取部位对RAW264.7细胞活力的影响 采
利用Design Expert 8.0.6软件进行计算，得出石胡荽 用 MTT 法进行检测。通过前期预实验，本研究设置空
醇提物的实际最优制备工艺为：乙醇体积分数 69.93%， 白组和以萃取物浓度计的 5 个不同浓度（50、25、12.5、
提取时间 2.09 h，料液比 1∶39.50（g/mL），同时预测出石 9.375、6.25 μg/mL）的药物组，于 490 nm 波长处测定各
胡荽总三萜提取率为1.161%。结合实际操作的方便性， 组吸光度，具体方法参考文献[24]。计算细胞活力：细胞
选择乙醇体积分数 70%、提取时间 2.0 h、料液比 1∶40 活力（%）＝（药物组吸光度/空白组吸光度）×100%。当
（g/mL）为石胡荽总三萜醇提物的最佳制备工艺。 细胞活力＞90%时，认为药物是在安全浓度范围内 。结
[25]
取石胡荽粗粉 1.00 g，按照该工艺条件平行操作 3 果显示，石油醚部位质量浓度为6.25 μg/mL、乙酸乙酯部
次 进 行 验 证 ，所 得 石 胡 荽 总 三 萜 的 提 取 率 分 别 为
位质量浓度为9.375 μg/mL、正丁醇部位质量浓度为12.5
1.092%、1.165%、1.127%，平均提取率为 1.134%（RSD＝
μg/mL及水部位质量浓度为25 μg/mL时，RAW 264.7细
0.03%），与预测值的相对误差为 0.02%。这说明该方法
胞的活力均大于 90%，且差异无统计学意义（P＞0.05），
稳定、可靠，可用于石胡荽总三萜醇提物的制备。
故本研究选择以上浓度进行后续实验。结果见图3。
2.8 石胡荽醇提物不同萃取部位的抗炎活性测定
2.8.3 不同萃取部位对 RAW264.7 细胞 NO 生成的影
2.8.1 样品的制备 按照最佳工艺制备石胡荽醇提物，
得率为11.42%。浓缩后，用水分散，依次用石油醚、乙酸 响 利用脂多糖诱导 RAW264.7 细胞建立细胞炎症模
[26]
乙酯、正丁醇分别萃取得到不同萃取部位及萃取后剩下 型 ，设置空白组、加1 μg/mL脂多糖致炎的模型组和不
的水部位，石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水 同给药浓度的药物组，采用Griess试剂法于540 nm波长
部位的总三萜含量分别为 0.410%、0.455%、0.182%、 处测定不同组别的吸光度，以 NO 生成抑制率评价石胡
0.109%。各部位干燥后分别称取1.0 mg样品，用二甲基 荽总三萜醇提物不同萃取部位的抗炎活性，具体方法参

· 324 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 3 中国药房 2023年第34卷第3期