Page 76 - 《中国药房》2023年3期
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效，用于治疗百日咳、鼻炎和鼻窦炎、疟疾、关节扭伤、风                          1.3 细胞
                    [2]
          湿疼痛等症 。石胡荽中已报道的化学成分主要为倍半                                小鼠单核巨噬细胞RAW264.7购自上海中乔新舟生
                                                    [3]
          萜类、三萜及其苷类、黄酮及其苷类、挥发油类等 。研                           物科技有限公司，冻存于贵州省中国科学院天然产物化
          究发现，三萜类化合物具有溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病                          学重点实验室。
          毒、降低胆固醇等多种生物活性              [4―5] 。近年来，关于石胡         2 方法与结果
          荽三萜类化合物的化学成分组成               [6―8] 、药理作用 [9―12] 、临  2.1 石胡荽总三萜含量测定方法的确定
          床应用及质量控制         [13―14] 等方面的研究已有较多报道。                  根据 2020 年版《中国药典》（一部）中三萜含量的测
                                                                    [19]
                  [15]
          成光宇等 曾利用加热回流提取法和正交实验优化石                             定方法 ，并结合中华人民共和国农业行业标准《灵芝
                                                                                                         [20]
          胡荽总三萜皂苷的提取工艺，但正交实验存在实验次数                            总三萜含量的测定分光光度法：NY/T 3676-2020》 ，确
          多、未考虑因素之间的相互影响等不足。响应面法目前                            定本研究以齐墩果酸为对照品，采用紫外分光光度法
          被广泛应用于中药提取工艺研究中                [16―18] ，该法可通过将     （波长550 nm）测定石胡荽总三萜的含量。
          实验结果进行方差分析、回归分析来寻求最佳工艺参                             2.2 溶液的制备
          数，实现实验设计、回归分析、预测优化的功能，可弥补                           2.2.1 对照品贮备液的制备 精密称取齐墩果酸对照
          正交实验的缺陷。本研究拟在单因素实验的基础上，采                            品5.00 mg，置于25 mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容，得
                                                              到质量浓度为 0.20 mg/mL 的齐墩果酸对照品贮备液，
          用响应面法进一步综合分析影响热回流提取石胡荽醇
                                                              备用。
          提物的关键因素，确定最佳工艺参数；在此基础上，采用
                                                              2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取石胡荽粗粉 1.00
          系统溶剂萃取法得到石胡荽醇提物的不同萃取部位，并
                                                              g，置于 150 mL 锥形瓶中，加 70% 乙醇 40 mL，称定质量
          初步考察不同萃取部位的抗炎活性，以期为该植物资源
                                                              后加热回流提取2.0 h。提取完毕后将提取液静置，冷却
          的合理开发利用提供参考。
                                                              后再次称质量并补足减失的质量，过滤除杂；滤液减压
          1 材料
                                                              浓缩干燥后用乙醇转移至25 mL容量瓶中并定容，得到
          1.1 主要仪器
                                                              供试品溶液。
              本研究所用主要仪器有：UV-1800型紫外-可见分光
                                                              2.3 方法学考察
          光度计（日本 Shimadzu 公司），OSB-2200 型旋转蒸发仪
                                                              2.3.1 标准曲线的绘制 准确移取齐墩果酸对照品贮
         （日本EYELA株式会社），BT25S型电子分析天平（德国
                                                              备液 0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 mL 于 10 mL 试管
          Sartorius 公司），DK-98-Ⅱ型恒温水浴锅（美国 Trisite 公
                                                              中。将试管置于90 ℃的水浴锅中挥干溶剂，加入5%香
          司），CCL-170B-8 型 CO2 细胞培养箱（新加坡 ESCO 公
                                                              草醛-冰醋酸溶液 0.10 mL、高氯酸 0.80 mL，混匀后于
          司），TS2 FL 型倒置荧光显微镜（日本 Nikon 公司），
                                                              60 ℃水浴中保温显色20 min，取出后迅速置于冰水浴中
          EPOCH型多功能酶标仪（美国Bio-Tek公司）。
                                                              冷却 5 min，终止显色反应。然后加入 5.00 mL 冰醋酸，
          1.2 主要药品与试剂
                                                              混匀，室温放置 10 min。以相应试剂为空白对照，于
              石胡荽药材购自云南中药市场，经贵州中医药大学                          550 nm 波长处测定吸光度。以齐墩果酸质量浓度为
          药学院孙庆文教授鉴定为石胡荽 C. minima （L.） A.                    横坐标（x）、吸光度为纵坐标（y）进行线性回归，得回归

          Braun et Aschers.的干燥全草；药材标本存放于贵州省中                  方程为 y＝61.899 0x－0.0465 9（R ＝0.999 4）。结果表
                                                                                           2
          国科学院天然产物化学重点实验室（标本号为CM202106）。                      明，齐墩果酸在 0.003 1～0.019 0 mg/mL 范围内与吸光
          齐墩果酸对照品（批号PS0236-0100，纯度≥99.0%）购自                   度呈良好的线性关系。
          成都普思生物科技股份有限公司；地塞米松对照品（批                            2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品贮备液适量，按
          号 D4902-25MG，纯度≥97.0%）、脂多糖、胎牛血清、                   “2.3.1”项下方法操作，连续测定6次吸光度。结果显示，
          DMEM 培养基、胰蛋白酶均购自美国 Sigma 公司；一氧                      吸光度的RSD为 0.76%（n＝6），表明仪器精密度良好。
          化氮（NO）检测试剂盒（批号 PS0236-0100）购自上海碧                    2.3.3 稳定性试验 精密吸取供试品溶液适量，按

          云天生物技术有限公司；MTT试剂购自北京索莱宝科技                          “2.3.1”项下方法操作，分别在显色后 0、10、20、40、60、
          有限公司；无水乙醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸、二甲基亚                          80 min 时测定吸光度。结果显示，吸光度的 RSD 为
          砜均为国产分析纯，水为纯化水。                                     0.78%（n＝6），表明供试品溶液显色后在80 min内稳定。


          · 322 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 3                               中国药房  2023年第34卷第3期
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