Page 60 - 《中国药房》2023年1期

“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将22批桦
褐孔菌药材的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统（2012版）》进行分析。选取S17号样品作为参照
图谱，时间窗宽度设为0.1 min，经多点矫正，生成桦褐孔
菌药材的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹图谱。另外，
取“2.2.2”项下混合对照品溶液适量，按“2.2.1”项下色谱
条件进样测定，记录色谱图。结果显示，22 批桦褐孔菌
药材共有10个共有峰；与混合对照品色谱图对比后，指
认出 3 号峰为栓菌酸，4 号峰为桦褐孔菌醇，9 号峰为麦
角甾醇，10号峰为羊毛甾醇。结果见图3、图4。
1～6：S1～S6样品；7：桦褐孔菌醇对照品；8～19：S7～S18样品；
20：桦褐孔菌醇对照品；21～24：S19～S22样品 320 4（S）
图2 桦褐孔菌药材中桦褐孔菌醇的薄层色谱图 280
240
2.2.2 溶液的制备 （1）供试品溶液的制备。取桦褐孔 200 3
菌药材粉末（过四号筛）2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶 U/mV 160
120
中，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，超声处理30 min；放 80
10
冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL容量 40 9
0
瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
续滤液，即得供试品溶液。（2）对照品溶液的制备。取栓 t/min
3：栓菌酸；4：桦褐孔菌醇；9：麦角甾醇；10：羊毛甾醇
菌酸、桦褐孔菌醇、麦角甾醇、羊毛甾醇对照品适量，精
图3 混合对照品溶液HPLC色谱图
密称定，加甲醇溶解并定容，制成上述成分质量浓度分
4（S）
别为 368.84、201.02、390.37、285.76 μg/mL 的单一对照
3 000
品溶液。精密吸取各单一对照品溶液 2、5.5、0.5、2 mL， 2 800 3
置于同一 10 mL 容量瓶中，混匀，过 0.45 μm 微孔滤膜， 2 600 1
2 400 7 10
取续滤液，即得栓菌酸、桦褐孔菌醇、麦角甾醇、羊毛甾 2 200
2 5 6 8 9
醇质量浓度分别为 73.77、110.56、19.52、57.15 μg/mL 的 2 000 R S22
1 800 S21
混合对照品溶液。 1 600 S20
S19
S18
2.2.3 精密度考察 取供试品溶液（S3 号样品），按照 U/mV 1 400 S17
S16
1 200 S15
S14
“2.2.1”项下色谱条件重复进样 6 次，记录色谱图。以桦 1 000 S13
S12
S11
褐孔菌醇为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相 800 S10
S9
600 S8
对峰面积。结果表明，各共有峰的相对保留时间RSD均 400 S7
S6
S5
小于0.49%，相对峰面积RSD均小于3.99%（n＝6），表明 200 S4
S3
S2
0 S1
仪器精密度良好。 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40
2.2.4 稳定性考察 取供试品溶液（S3 号样品）于室温 t/min
图4 桦褐孔菌药材HPLC叠加指纹图谱
放置 0、2、4、8、12、24 h 时，按照“2.2.1”项下色谱条件进
样测定，记录色谱图。以桦褐孔菌醇为参照峰，计算各 2.2.7 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明，各共 价系统（2012版）》计算22批桦褐孔菌药材HPLC图谱的
有峰的相对保留时间 RSD 均小于 0.88%，相对峰面积 相似度。结果显示，与对照指纹图谱相比，各批桦褐孔
RSD均小于2.89%（n＝6），表明样品溶液在室温放置24 菌药材样品图谱的相似度在 0.942～0.995 之间，表明各
h内稳定。 批样品间相似度良好。
2.2.5 重复性考察 精密称取 S3 号桦褐孔菌药材粉末 2.3 桦褐孔菌药材的化学模式识别分析
2 g，按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液 6 份，按照 2.3.1 聚类分析 以22批桦褐孔菌药材指纹图谱中10
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以桦褐孔 个共有峰峰面积为参量，采用 SPSS 23.0 软件进行聚类
菌醇为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰 分析，采用组间平均数联结法，以平方欧氏距离为度量
面积。结果表明，各共有峰的相对保留时间RSD均小于 标准进行聚类，并绘制树状图（图5）。结果显示，当平方
0.75%，相对峰面积RSD均小于4.06%（n＝6），表明方法 欧氏距离＞10 时，22 批桦褐孔菌样品可以分为两类，其
重复性良好。 中S1～S15、S19、S21、S22聚为第1类，S16～S18、S20聚
2.2.6 HPLC 指纹图谱的建立 取 22 批桦褐孔菌药材 为第2类。该聚类分析结果提示，桦褐孔菌药材间存在
粉末 2 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按 一定差异。

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