Page 51 - 《中国药房》2023年1期

察。该方法在给药后，使药物在体内产生药物效应，其
Keap1 69 kDa
原有成分可以在体内转化为活性成分或代谢后失活，或
没有被体内吸收，或通过第二信使而间接起作用 。这
[14]
Nrf2 130 kDa 是目前研究复方中药、民族药体外药理学常用的方法之
一，且在一定程度上能反映出药物的有效作用和分子机
HO-1 33 kDa 制。因此本研究采用血清药理学方法探讨药物在细胞
层面的抗氧化应激、抗凋亡机制。
Ndufa10 42 kDa 本课题组前期通过超高效液相色谱-四极杆/静电场
轨道阱高分辨质谱和气相色谱-质谱联用技术，对八味

Trx 12 kDa 沉香散灌胃大鼠后的血清进行鉴定，入血成分中有7种
成分具有抗氧化作用，其中秦皮乙素能有效清除自由
[15]
[16]
基 ，绿原酸能够螯合金属离子和清除自由基 ，没食子
β-actin 43 kDa
酸甲酯和没食子酸乙酯均具有抗氧化损伤活性 [17―18] ，山
空白组 模型组 八味沉香散中剂量组 [19]
图8 各组细胞中氧化应激相关蛋白表达的电泳图 柰酚具有较强的抗氧化活性 ，槲皮素对因氧化应激导
[20]
致的疾病有很好的预防和治疗作用 ，甲基丁香酚可抑
表3 各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平的检测结果 制缺氧/复氧损伤后人肾小管上皮细胞内ROS的释放 。
[21]
（x±s，n＝3）
由此推测这些化合物可能是八味沉香散通过抗氧化应
组别 Bcl-2 Bax Caspase-3 Cytc 激作用发挥保护心肌细胞作用的有效成分。
空白组 0.79±0.06 0.69±0.11 0.68±0.07 0.67±0.12
模型组 0.58±0.03 a 1.05±0.10 a 1.17±0.13 a 1.22±0.07 a 相关文献研究表明，八味沉香散含药血清在不影响
八味沉香散中剂量组 0.72±0.02 b 0.78±0.06 b 0.80±0.07 b 0.87±0.03 b 细胞存活率的前提下可提高氧糖剥夺损伤的H9c2细胞
a：与空白组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
存活率，这可能与其降低细胞氧化损伤和抑制细胞凋亡
Bcl-2 26 kDa 相关。当细胞受到缺氧损伤时，细胞膜受损，导致细胞
质内的LDH和CK释放，因此LDH和CK的释放量与细
胞受损程度相关，可作为药物细胞毒性评价指标。本实
Bax 20 kDa
验结果显示，H9c2细胞氧糖剥夺损伤后，给予八味沉香
散含药血清可抑制LDH和CK的释放，保护细胞膜完整
Cytc 14 kDa
性。氧化应激是心肌细胞缺血损伤的主要病理机制之
一。心肌缺血后持续的氧化应激导致细胞代谢副产
Caspase-3 35 kDa
物——ROS堆积，而此时在正常生理状态下机体维持氧
化-抗氧化系统平衡的内源性抗氧化剂 SOD 和 GSH 等
[22]
β-actin 43 kDa 不足以清除 ROS 。这种失衡导致细胞中调控 ROS 的
空白组 模型组 八味沉香散中剂量组 相应蛋白、相关氧清除剂和 ROS 相关因子发生了改变，
图9 各组细胞中凋亡相关蛋白表达的电泳图 进而氧化细胞大分子如蛋白质和脂质等，加剧机体损
4 讨论 伤。由此本研究进行了氧化应激相关指标的检测，结果

心肌缺血发病机制复杂，氧化应激和细胞凋亡是心 显示，氧糖剥夺损伤后，ROS 大量生成，抗氧化物质
CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px 等被大量消耗，持续生
肌缺血病理生理学中密切相关的两部分，自由基损伤和
成的 ROS 自由基作用于脂质发生过氧化反应生成
氧化应激是缺血再灌注损伤的关键环节并参与了损伤
MDA，加剧细胞膜损伤，调控氧化应激的相关蛋白
[12]
级联反应的每个步骤 。抑制细胞凋亡是心肌缺血治
（Keap1、Nrf2、Ndufa10、HO-1和Trx）表达升高；而给予八
[13]
疗中的保护策略之一 。H9c2 细胞被广泛用于心血管
味沉香散含药血清可降低细胞内ROS含量，提高以ROS
系统疾病药物作用的研究。氧糖剥夺损伤模型能最大
为底物的抗氧化物质CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px水
程度模拟心肌缺血病理生理情况下的细胞状态，是心肌
平，降低脂质过氧化产物MDA水平，降低氧化应激相关
缺血研究的经典细胞模型。基于此，本文建立 H9c2 细
蛋白（Keap1、Nrf2、Ndufa10、HO-1、Trx）表达，初步验证
胞的氧糖剥夺损伤模型，探讨八味沉香散含药血清对心 了八味沉香散含药血清降低细胞氧化损伤的作用。
肌缺血的保护机制。 ROS 簇的形成和积累没有得到有效清除并攻击线
“血清药理学”通过灌胃等方式让动物服药并在一 粒体造成线粒体渗透性转换孔开放，致使线粒体膜电位
段时间后采集血液、分离血清，将血清作为药源进行观 下降，并促使细胞色素C和凋亡诱导因子等凋亡蛋白释

中国药房 2023年第34卷第1期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 1 · 45 ·