Page 47 - 《中国药房》2023年1期

the mechanism of which is related to the reduction of oxidative damage and inhibition of cell apoptosis.
KEYWORDS Bawei chenxiang powder； myocardial ischemia； oxygen-glucose deprivation； oxidative stress； cell apoptosis

心肌缺血是心血管系统的常见病，严重威胁人类生 限责任公司进行分析与鉴定，符合2020年版《中国药典》
命健康，临床迫切需要安全有效的药物防治心肌缺血。 （一部）中的要求。用蒸馏水将八味沉香散配制成 0.5、
八味沉香散是中国传统藏药复方之一，其源于藏族医药 0.7、0.8 g/mL的混悬液，备用。
经典著作《四部医典》。该复方由沉香200 g、肉豆蔻100 本研究所用主要试剂为胎牛血清（上海依科赛生物
g、广枣100 g、石灰华100 g、乳香100 g、木香100 g、诃子 制品有限公司，批号 FSP500），DMEM 无糖培养基、
（煨）100 g、木棉花100 g组成，气芳香，味咸、涩、微苦，具 DMEM 培养基（武汉普诺赛生命科技有限公司，批号分
有清心热、养心、安神、开窍之功效，主要用于热病攻心、 别为 WH0521A291、WH0021D231），RIPA 裂解液、青霉
[1]
神昏谵语，临床上主要用于治疗冠心病、心绞痛等 。作 素链霉素混合液、磷酸盐缓冲液（PBS）（北京索莱宝
者课题组前期研究发现，八味沉香散能够降低由于冠状 科技有限公司，批号分别为 R0010、P1400、20201219），
动脉结扎引起的心肌缺血再灌注损伤和氧化应激反 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）检测试剂盒
应 [2―4] 。不同方式的八味沉香散提取液对异丙肾上腺 （南京建成生物工程研究所，批号 20201225），肌酸激酶
素、垂体后叶素导致的大鼠心肌收缩功能和舒张功能的
（creatine kinase，CK）试剂盒、超氧化物歧化酶（superoxide
下降 [4―6] 、心电图J点位移的程度 [2，7] 等均有显著的改善作
dismutase，SOD）试 剂 盒 、丙 二 醛（malondialdehyde，
[8]
用，可抑制氧化应激反应并促进抗凋亡基因的表达等 。
MDA）试剂盒、过氧化氢酶（catalase，CAT）试剂盒、谷胱
血清药物化学研究发现，给予八味沉香散后大鼠血清中
甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）试剂盒
共鉴定出16种非挥发性成分、24种挥发性成分，其中30
和线粒体呼吸链复合酶Ⅰ（respiratory chain complex
种为原型化合物的入血成分 。本实验采用血清药理学
[9]
Ⅰ，ComplexⅠ）试剂盒（上海科兴商贸有限公司，批号分别
方法，进一步研究在氧糖剥夺损伤细胞模型中，八味沉
为 F3651-A、F3262-A、F8503-A、F8502-A、F3642-A、
香散含药血清改善心肌缺血损伤的可能机制，以期为八
F40416-A），BCA蛋白定量试剂盒、Annexin Ⅴ-FITC/PI 细
味沉香散的临床应用提供实验依据，促进其现代化
胞凋亡检测试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）
研究。
（上海碧云天生物技术有限公司，批号分别为 P0009、
1 材料
C1062L、C2003S），2，7-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2，7-
1.1 细胞与动物
dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）活性氧
本研究所用细胞为大鼠H9c2细胞（货号CL-0089），
（reactive oxygen species，ROS）荧光探针（德国 Sigma
购自武汉普诺塞生命科技有限公司。SPF级雄性SD大
公司，批号 4091990），兔源凋亡蛋白 B 细胞淋巴瘤 2
鼠50只，体质量200～220 g，购自西安交通大学[实验动
（B-cell lymphomaz，Bcl-2）相关 X 蛋白（Bcl-2-associated
物使用许可证号：SYXK（青）2020-0001]，饲养于青海大
X protein，Bax）、胱天蛋白酶 3（Caspase-3）、细胞色素 C
学医学院药学系实验中心（正常光照、自由饮食）。本实
（cytochrome C，Cytc）抗体（美国 CST 公司，批号分别为
验所有操作均符合实验动物伦理学要求，并通过青海大
2772T、14220T、11940S），兔源核转录因子E2相关因子2
学动物伦理委员会批准（伦理号2021-01）。
1.2 主要仪器 （nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）抗体、
本研究所用主要仪器有 SW-CJ-1F 型超净工作台 Kelch 样 ECH 关联蛋白 1（Kelch ECH association protein
（苏州安泰空气技术有限公司），51119770DP型酶标仪、 1，Keap1）抗体、血红素加氧酶 1（heme oxygenase 1，HO-
Pico21型台式高速低温冷冻离心机（美国Thermo Fisher 1）抗体、硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）抗体、抗凋亡蛋白
Scientific公司），DMi8型荧光显微镜、DMi1型倒置显微 Bcl-2 抗 体（美 国 Abcam 公 司 ，批 号 分 别 为 ab92946、
镜（德国 Leica 公司），Amersham Imager 600 型显影仪 ab139729、ab68477、ab109385、ab196495），NADH 氧化
（美国通用电气公司），CytoFLEX S型流式细胞仪（美国 还 原 酶 辅 酶 10（NADH oxidoreductase coenzyme 10，
Beckman Coulter公司）。 Ndufa10）抗体（美国 Thermo Fisher Scientific 公司，批号
1.3 主要药品与试剂 336BEA22），内参兔源 β-肌动蛋白（β-actin）抗体（美国
本研究所用主要药品为八味沉香散，购自西藏神猴 Proteintech公司，批号236601-1-AP），辣根过氧化物酶标
药业有限责任公司（批号20210601），由西藏神猴药业有 记的兔抗 IgG 二抗、SuperECL Plus 超敏发光液、CCK-8

中国药房 2023年第34卷第1期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 1 · 41 ·