Page 36 - 《中国药房》2023年1期
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脓毒症是由感染引起的多器官功能障碍和全身炎                           有限公司；脂多糖（批号0000081275）购自美国Sigma公
                      [1]
                                                                      ®
          症反应综合征 。因脓毒症引起的心肌损伤称为脓毒症                            司；Eastep  Super总RNA提取试剂盒（批号0000501988）
          心肌病（sepsis-induced cardiomyopathy，SIC），其病理表         购自上海普洛麦格生物产品有限公司；逆转录试剂盒
          现为炎症免疫反应、氧化还原稳态的变化和线粒体功能                           （批号 01075502）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公
                [2]
          紊乱等 。近年来，虽然通过抗感染手段治疗 SIC 得到                         司；ChamQ Universal SYBR Qpcr Master Mix 试剂盒（批
                                                  [3]
          了进一步发展，但其病死率仍高达 70%～90% 。有研                         号Q711-02）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；其
          究证实，中医药治疗能够有效逆转脓毒症引发的脏器损                            余试剂均为分析纯，水为纯化水。白细胞介素 6（inter‐
                         [4]
          伤，降低其病死率 。从辨证论治和整体观出发，脓毒症                           leukin-6，IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis
          性心肌损伤属于中医“温病”及由“温病”引起的“心悸”                          factor-α，TNF-α）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-
         “怔忡”“胸痹”等范畴，其病因病机归纳为温毒内蕴、耗                           3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）的引物序列由生工
                                                 [5]
          气伤阴，而清热解毒和益气养阴为其重要治则 。                              生物工程（上海）股份有限公司合成。
              中药知母归属清热药，是百合科植物知母 Anemar‐                      1.3 动物
          rhena asphodeloides Bge.的干燥根茎，具有清热泻火、滋                  本研究所用动物为SPF级雄性C57BL/6J小鼠，6～8
                    [6]
          阴润燥之功 。《药性论》记载：“知母主治心烦躁闷”；《日                        周龄，体质量（20±2） g，购自北京华阜康生物科技股份
                                                        [7]
          华子本草》记载：“知母润心肺，补虚乏，安心，正惊悸”。                         有限公司，动物生产许可证号为 SCXK（京）2020-0004。
          现代药理研究亦表明，知母具有治疗心血管疾病的作                             购入后，所有动物均于标准动物房内饲养。本实验经河
            [8]
          用 。知母主要含双苯吡酮类和皂苷类成分，其中双苯                            北中医学院实验动物中心伦理审查委员会批准（批准号
          吡酮类成分芒果苷和皂苷类成分知母皂苷BⅡ、知母皂                            为DWLL202203037）。
          苷 AⅢ均具有抗炎、抗氧化应激及保护心血管等作                             2 方法与结果
          用 [9―11] 。综合古医籍记载及现代药理研究，笔者推测知                      2.1 知母不同提取部位的制备
          母可能对脓毒症性心肌损伤具有一定改善作用。因此，                            2.1.1 知母水提物的制备 称取知母饮片粗粉 500 g，
          本研究首先考察知母总双苯吡酮、知母总皂苷和知母水                            以 6 倍量水加热回流提取 3 次、每次 1 h，合并 3 次提取
          提物3个提取部位对脓毒症性心肌损伤模型小鼠存活情                            液，过滤，减压浓缩成质量浓度为 1 g/mL（以生药量计）
          况的影响，然后再进一步考察双苯吡酮类成分芒果苷和                            的浓缩液。将其中部分浓缩液冷冻干燥48 h，得知母水
          皂苷类成分知母皂苷 BⅡ、知母皂苷 AⅢ对脓毒症性心                          提物冻干粉。
          肌损伤模型小鼠的药效作用，为阐明知母改善脓毒症性                            2.1.2 知母总双苯吡酮和知母总皂苷的制备 取“2.1.1”
          心肌损伤的作用及可能的活性物质基础提供实验参考。                            项下剩余浓缩液，采用水提醇沉法除去多糖，过滤，将滤
          1 材料                                                液减压浓缩至无醇味。依据本课题组前期优化的实验

          1.1 主要仪器                                            方法，将浓缩液于活化的D101大孔树脂柱上样，静置吸
              本研究所用主要仪器有 D101 型大孔吸附树脂柱                        附饱和后用4倍柱体积蒸馏水洗脱（流速为2 mL/min），
         （天津市光复精细化工研究所），UV-2600型紫外-可见分                        再依次使用4倍柱体积20%、30%、95%乙醇洗脱（流速为
          光光度计（苏州岛津仪器有限公司），SZ61型变焦式体式                         1 mL/min），弃蒸馏水和30%乙醇洗脱液，收集20%、95%
          显微镜（日本 Olympus 公司），VHX-6000 型基恩士数码                  乙醇洗脱液，分别减压浓缩并冷冻干燥48 h，得9.15 g知母
          成像系统[基恩士（中国）有限公司]，4375786型PCR仪、                     总双苯吡酮冻干粉和26.31 g总皂苷冻干粉。经紫外-可
          QuantStudio 1 型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）                   见分光光度计测定，知母总双苯吡酮冻干粉中总双苯吡
          仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），LSM800 型激光        酮含量为65.87%，总皂苷冻干粉中总皂苷含量为61.99%。
          共聚焦显微镜（德国Zeiss公司）。                                  2.2 知母不同提取部位对脓毒症性心肌损伤模型小鼠
          1.2 主要药品与试剂                                         存活率的影响
              知母饮片（批号 200601）购自河北安国振宇药业有                          将50只小鼠按照体质量随机分为5组，分别为正常
          限公司，经河北省中药炮制技术创新中心郑玉光教授鉴                            对照组、模型组、知母总双苯吡酮组、知母总皂苷组和知
          定为百合科植物知母A. asphodeloides Bge.的干燥根茎。                母水提物组，每组10只。参考文献[12－13]方法设置剂
          芒果苷对照品（批号G18J10L93274，纯度＞95%）购自上                    量并进行实验：正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水，模
          海源叶生物科技有限公司；知母皂苷 AⅢ对照品（批号                           型组和3个给药组小鼠腹腔注射30 mg/kg脂多糖构建急
          21042003，纯度＞99%）、知母皂苷 BⅡ对照品（批号                      性脓毒症性心肌损伤模型。在脂多糖注射前1 h和注射
          21022614，纯度＞99%）均购自成都普菲德对照品科技                       后 24、48 h，各给药组小鼠分别灌胃相应药物，共给药 3


          · 30 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 1                                中国药房  2023年第34卷第1期
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