Page 53 - 《中国药房》2022年24期
P. 53

症 。有研究指出，厚朴排气合剂中厚朴酚含量最高，约                          制成混合对照品储备液；精密量取上述混合对照品储备
            [2]
          占总成分含量的 90%，和厚朴酚次之，同时还有少量的                         液 1.00、0.80、0.64、0.36、0.28、0.10、0.03 mL，分别置 于
          大黄素和大黄酚；其中，厚朴酚、和厚朴酚能促进肠道蠕                          10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，混匀，配制成厚朴酚质
          动，是厚朴排气合剂的主要药效成分               [3－4] 。             量 浓 度 分 别 为 11.38、22.76、45.52、91.04、136.56、
              血浆蛋白结合率会直接影响体内游离药物的浓度，                         182.08、227.60 μg/mL，和厚朴酚质量浓度分别为3.90、

          从而影响药物的吸收、分布、代谢和消除，最终影响其药                          7.80、15.60、31.20、46.80、62.40、78.00 μg/mL的系列混合
          效学特征    [5－6] 。考虑到厚朴排气合剂单次给药剂量较                    工作液。精密量取混合对照品储备液适量，加入空白血
                             [7]
          大、相关不良反应较多 ，故有必要对其主要药效成分的                          浆，配制成厚朴酚质量浓度分别为 1.14、2.28、9.10、
          血浆蛋白结合率进行测定，以有助于研究该合剂的体内                           18.21 μg/mL，和厚朴酚质量浓度分别为0.39、0.78、3.12、
          代谢过程，促进临床合理用药。基于此，本研究拟采用                           6.24 μg/mL 的质控样品。上述溶液均于 4 ℃下保存，
          超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱（UPLC-MS/MS）                      备用。
          技术结合平衡透析法测定厚朴排气合剂主要药效成分                            2.2 样品预处理方法
          厚朴酚、和厚朴酚在牛、兔、大鼠血浆中的蛋白结合率并                          2.2.1 透析内液 吸取平衡透析实验中的透析内液
          进行比较，旨在为阐明该合剂有效成分的血浆蛋白结合                           200 μL，置于 1.5 mL EP 管中，加入乙腈 600 μL 沉淀蛋
                                                             白，涡旋振荡3 min后以12 000 r/min离心10 min。取上
          特性提供参考。
                                                             清液，以氮气流吹干，残渣用甲醇200 μL复溶，涡旋振荡
          1 材料
                                                             3 min后以12 000 r/min离心10 min，取上清液进样测定。
          1.1 主要仪器
                                                             2.2.2 透析外液 吸取平衡透析实验中的透析外液
              本研究所用主要仪器包括 API 5500 型 UPLC-MS/
                                                             200 μL，置于 1.5 mL EP 管中，以 12 000 r/min 离心 10
          MS系统（美国AB Sciex公司）、BP210D型万分之一电子
                                                             min，取上清液进样测定。
          天平（德国Sartorius公司）、20HR型高速冷冻离心机（科
                                                             2.3 色谱与质谱条件
          大创新股份有限公司）、ZH-2型涡旋振荡仪（上海精胜科
                                                                 以 ACQUITY UPLC BEH-C18 （2.1 mm×50 mm，1.7
          学仪器有限公司）、MG-2200型氮吹仪（上海爱郎仪器有
                                                             μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）为流动相
          限公司）等。
                                                             进行梯度洗脱（0～3 min，65%A→75%A）；流速为 0.3
          1.2 主要药品与试剂
                                                             mL/min；柱温为40 ℃；进样量为2 μL。
              厚朴排气合剂（批号20080601，每1 mL相当于饮片
                                                                 采用电喷雾离子源（electrospray ionization，ESI），以
          0.8 g）购自瑞阳制药股份有限公司；厚朴酚对照品（批号
                                                             选择反应监测（selective reaction monitoring，SRM）模式
          110729-201910，纯度 99.0%）、和厚朴酚对照品（批号
                                                             进行负离子扫描；离子传输管温度为 325 ℃；气化室温
          110730-201910，纯度 99.8%）均购自中国食品药品检定
                                                             度为350 ℃；电喷雾电压为3 kV；鞘气流速为50 Arb；辅
          研究院；牛血浆（批号 J28S10S99034）、兔血浆（批号
                                                             助气流速为10 Arb；离子扫描范围为m/z 50→1 500。用
          J10O10S99437）、磷 酸 盐 缓 冲 液（pH7.2～7.4，批 号
                                                             于定量分析的离子对分别为m/z 264.4→247.1、244.9（厚朴
          8121556）均购自上海源叶生物科技有限公司；大鼠血浆
                                                             酚，去簇电压分别为－116、－110 V，碰撞电压分别为－31、
          采自 SPF 级 SD 大鼠（雌雄各半）；透析袋（截留分子量 1
                                                             －34 V）和m/z 264.4→246.9、223.1（和厚朴酚，去簇电压分别
          kDa）购自广州瑞舒生物科技有限公司；甲醇、乙腈、甲酸
                                                             为－110、－100 V，碰撞电压分别为－28、－40 V）。
          为质谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。                              2.4 方法学考察
          2 方法与结果                                                依照 2020 年版《中国药典》（四部）（以下简称“药
          2.1 溶液的制备                                          典”）通则“生物样品定量分析方法验证指导原则”的相

          2.1.1 空白透析液 取磷酸盐缓冲液，加水稀释并定容                        关要求进行方法学考察 。
                                                                                 [8]
          至500 mL，作为空白透析液，于4 ℃下保存，备用。                        2.4.1 专属性试验 分别取空白血浆、空白血浆+混合
          2.1.2 含药透析液 分别取厚朴排气合剂适量，加至                         对照品溶液（厚朴酚、和厚朴酚的最终质量浓度分别为
         “2.1.1”项下空白透析液中，混匀，得质量浓度分别为                         2.28、0.78 μg/mL）、平衡透析实验的透析内液样品（9.0
          4.5、9.0、13.5 μg/mL（按饮片质量计）的含药透析液。                  μg/mL 含药透析液平衡透析 24 h 后所得），按照“2.2.1”
          2.1.3 混合工作液和质控样品 精密称定厚朴酚、和厚                        项下方法处理后，再按照“2.3”项下条件进样测定，记录
          朴酚对照品适量，置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，配                        色谱图。结果显示，在上述条件下，厚朴酚、和厚朴酚色


          中国药房  2022年第33卷第24期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 24    · 2991 ·
   48   49   50   51   52   53   54   55   56   57   58