Page 43 - 《中国药房》2022年23期
P. 43

超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（ultra-                      2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取9个对照品粉末各
          performance  liquid  chromatography-quadrupole-time-of-flight   适量，分别用少量二甲基亚砜助溶，以80%甲醇为溶剂，
          mass spectrometry，UPLC-Q-TOF/MS）技术具有高灵敏            配制成单个对照品贮备液（1 mg/mL）及混合对照品溶液
          度、高分辨率的特点，已广泛用于中药化学成分的分离                          （10 μg/mL），4 ℃避光保存，备用。
                    [5]
          和结构表征 。全信息串联质谱法作为数据依赖型串联                           2.2 检测条件
          质谱法的一种，具有全面、准确、简便、灵活的特点，可为                         2.2.1 色谱条件 采用 ACQUITY PRM HSS T3 FIT 色
          成分解析提供充足、可靠的数据源。此外，UNIFI平台功                        谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），以 0.1% 甲酸水溶液
                                                            （A）、乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～3 min，5%B；
          能强大，具有自动离子流提取、预测分子式、商用/自建数
                                                             3～10  min，5%B→10%B；10～20  min，10%B→30%B；
          据库检索等功能，可实现化学成分快速、靶向分析，在质
                                                             20～30 min，30%B→65%B；30～35 min，65%B→95%B；
          谱数据后处理方面展现出了良好的应用前景。基于此，
                                                             35～37 min，95%B→100%B；37～40 min，100%B）；进样
          本研究首先建立 UPLC-Q-TOF/MS 分析方法，基于全信
                                                             体积为2 μL；流速为0.3 mL/min；柱温为40 ℃。
          息串联质谱数据采集模式，全面采集鸡骨草质谱数据；
                                                             2.2.2 质谱条件 采用电喷雾离子源，质量扫描范围为
          然后整理关于鸡骨草化学成分的文献报道，建立鸡骨草
                                                             质荷比（m/z）50～1 500。优化的仪器参数如下：在正、负
          化学成分数据库；再利用 UNIFI 平台，通过靶向与非靶
                                                             离子检测模式下，毛细管电压分别为3.0 kV（+）和2.5 kV
          向分析快速解析鸡骨草的化学成分，以期为鸡骨草药效
                                                            （－）；锥孔电压为40 V，锥孔气流量为50 L/h，脱溶剂氮
          物质的阐释、质量标准的提升奠定基础。
                                                             气流量为600 L/h，氩气流量为0.15 mL/min，离子源温度
          1 材料                                               为120 ℃，脱溶剂气温度为300 ℃，低能通道中碰撞能量
          1.1 主要仪器                                           设置为 6 V，高能通道中碰撞能量设置为 20～35 V。亮
              Acquity UPLC Ⅰ-Class 型超高效液相色谱系统、               氨酸-脑啡肽（100 ng/L）用作Lock Spray实时校正，流速
          Xevo G2-XS Q Tof 型四极杆飞行时间质谱仪（配有                    为10 μL/min。
          UNIFI 科学信息学系统 V1.7 和 Masslynx 4.1 质谱工作             2.3 数据后处理
          站）均购自美国 Waters 公司；Q-250A3 型高速多功能粉                     （1）以“鸡骨草”“Abrus cantoniensis Hance”为检索
          碎机购自上海冰都电器有限公司；KQ-500E型超声波清                        词，通过检索中国知网、PubMed等数据库，收集、整理鸡
          洗器购自昆山市超声仪器有限公司。                                   骨草所含化学成分的信息，建立鸡骨草化学成分数据
          1.2 主要药品与试剂                                        库。（2）将质谱“原始数据”和“鸡骨草化学成分数据库”
              鸡骨草药材购自北京本草方源药业有限公司，经广                         导入 UNIFI V1.7 平台，进行靶向分析。参数设置：高能
          西中医药大学药学院谭勇教授鉴定为豆科植物广州相                            量强度阈值 50.0，低能量强度阈值 400.0；精确质量数偏
          思子 A. cantoniensis Hance 的干燥地上部分。下箴刺桐              差±5.0 mDa，保留时间容差0.1 min；正离子模式下选择
                                                                           +
                                                                   +
          碱、牡荆素、异牡荆素、木犀草素4种对照品（批号分别为                         [M+H] 、[M+Na] 为加合离子，负离子模式下选择[M－
                                                                            －
                                                               －
          RFS-X06801909002、RFS-M02302002022、RFS-Y11602-      H] 、[M+HCOO] 为加合离子；正离子校正质量数为
                                                             556.276 6，负离子校正质量数为 554.262 0。对于 UNIFI
          107028、RFS-M00702004028，纯度均大于 98%）均购自
                                                             平台靶向匹配的化合物，需通过对照品比较、质谱数据
          成都瑞芬思生物科技有限公司；葫芦巴碱、芒柄花素、夏
                                                             比较、文献比较等方法进一步确证，以排除假阳性结果。
          佛塔苷、异夏佛塔苷、维采宁-Ⅱ5种对照品（批号分别为
                                                            （3）采用UNIFI V1.7平台和Masslynx 4.1软件，通过元素
          AF21062651、AF20052952、AF21061501、AF21062602、
                                                             匹配、二级碎片分析及特征碎片、质谱数据库信息比较
          AF20112508，纯度均大于 98%）均购自成都埃法生物科
                                                             和对照品比较等多种方法，对未匹配的化合物进行非靶
          技有限公司；质谱级乙腈、甲醇、甲酸均购自美国 Fisher
                                                             向分析。
          公司；亮氨酸-脑啡肽（批号为ST158449，纯度大于98%）
                                                             3 结果与分析
          购自美国 Sigma-Aldrich 公司；其他试剂均为分析纯，水
                                                                 采用UPLC-Q-TOF/MS技术结合UNIFI平台对鸡骨
          为屈臣氏蒸馏水。
                                                             草和混合对照品进行采集和分析，得到正、负离子模式
          2 方法                                               的基峰色谱图（base peak chromatogram，BPC），见图 1。
          2.1 样品制备                                           结果显示，共鉴定出46种化合物，包括靶向分析的27种
          2.1.1 供试品溶液的制备 取鸡骨草适量，粉碎，过2号                       化合物和非靶向分析的19种化合物。其中，黄酮类化合
          筛，精密称取鸡骨草粉末 50 mg，加入 10 mL 80% 甲醇，                 物有 19 种，三萜类化合物有 8 种，生物碱类化合物有 3
          涡旋2 min，超声（功率150 W，频率50 kHz）溶解30 min，              种，有机酸类化合物有 5 种，其他类化合物有 11 种。通
          静置放冷，过滤，收集滤液，以12 000 r/min 离心 15 min，              过与对照品比对确证了9种化合物。鸡骨草中化学成分
          取上清液，备用。                                           的详细分析结果见表1。


          中国药房  2022年第33卷第23期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 23    · 2853 ·
   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48