Page 83 - 《中国药房》2022年21期
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reversed significantly（P＜0.05），the pathological changes of ovarian tissue were improved to varying degrees. CONCLUSIONS
          Bushen qiangshen tablet can regulate the secretion of sex hormones in PCOS model rats and improve ovarian cystic lesions. Its
          mechanism may be related to the upregulation of PI3K/Akt/mTOR and PI3K/Akt/GLUT4 signaling pathways.
          KEYWORDS    Bushen qiangshen tablet； polycystic ovary syndrome； PI3K/Akt/mTOR signaling pathway； PI3K/Akt/GLUT4
          signaling pathway


              多 囊 卵 巢 综 合 征（polycystic ovary syndrome，       炔雌醇环丙孕酮片（拜耳医药保健有限公司，批号
          PCOS）属妇科内分泌疾病范畴，常见于青春期和育龄期                         KT062FL2，规格0.2 mg/片），盐酸二甲双胍片（上海寿如
          女性，主要临床症状为月经失调、慢性无排卵、雄激素水                          松药业泌阳制药有限公司，批号 20031702，规格 0.25
          平升高及卵巢多囊样改变，并伴随生殖功能障碍、胰岛                           g/片），来曲唑（上海麦克林生化科技有限公司，批号
                                                  [1]
          素抵抗（insulin resistance，IR）等代谢异常症状 。目前              C12785740），羧甲基纤维素钠（CMC-Na，国药集团化学
          西医治疗PCOS多以激素替代、调经及促排卵为主，但患                         试剂有限公司，批号 20160704），氨基甲酸乙酯（天津市
          者妊娠率低，且存在子宫异常出血、胃肠道不适、肝功能                          光复科技发展有限公司，批号 20210902），苏木素染色
          损害等多种副反应        [2―3] 。中医古籍尚无PCOS记载，根据             液、伊红染色液（福州飞净生物科技有限公司，批号分别
          临床表现可将其归为“不孕症”“闭经”“月经过少”“月经                        为 190805、20211009），雌二醇（estrogen，E2 ）、睾酮（tes‐
          后期”“癥瘕”范畴，其发病以肾虚为本，继发肝瘀、脾虚、                        tosterone，T）、促 性 腺 激 素 释 放 激 素（gonadotropin-
          痰饮、水湿互结，终成PCOS         [4―5] 。故中医治疗PCOS多从          releasing hormone，GnRH）、促 卵 泡 素（follicle stimula-
          补益脾肾入手，进而补肾助阳、温通胞络、滋阴填精，疗                          ting hormone，FSH）、促黄体生成素（luteinizing hormone，
                [6]
          效明显 。                                              LH）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（南京建成生物
              补肾强身片是由淫羊藿、菟丝子、金樱子、女贞子和                        工 程 研 究 所 ，批 号 分 别 为 H102-1、H090-1-2、H297、
          狗脊（烫）5味中药加工而成的中药成方制剂，收录于《卫                         H101-1-2、H206-1-2），兔 SP 试剂盒、DAB 显色试剂盒
          生部药品标准中药成方制剂》（第十五册），具有补肾强                         （北京中杉金桥生物技术有限公司，批号分别为 SP-
          身的功效。方中淫羊藿、菟丝子均可治疗PCOS，且作用                         9001、ZLI-9018），兔抗大鼠磷酸化 Akt（p-Akt）、磷酸化
          机制与磷脂酰肌醇 3 激酶（phosphoinositide 3-kinase，           mTOR（p-mTOR）抗体（北京博奥森生物技术有限公司，
          PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B，Akt）信号通路相            批号分别为 bs-6417R、bs-5331R），兔抗大鼠 PI3K 抗体、
          关 [7―8] 。该通路的下游信号蛋白有哺乳动物雷帕霉素靶                      兔抗大鼠GLUT4抗体、总RNA提取试剂、cDNA合成试
          蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）和葡萄糖         剂盒、实时荧光定量 PCR 扩增试剂（武汉赛维尔生物科
          转运蛋白 4（glucose transporter 4，GLUT4），可以分别调          技有限公司，批号分别为 GN11769、GB11244、R1100、
          控细胞自噬和胰岛素抵抗，进而影响卵泡发育和卵巢多                           G3330、G3320）。PCR 引物根据 GenBank（http：//www.
                  [9]
          囊性改变 ，且临床研究中也证实了 PCOS 患者存在                         ncbi. nlm. nih. gov/）已 发 表 的 大 鼠 PI3K、Akt、mTOR、
                                 [10]
          PI3K、Akt 水平降低的情况 。基于此，笔者建立 PCOS                    GLUT4、GAPDH基因序列设计（引物序列及扩增产物长
          模型大鼠模型，观察补肾强身片对大鼠激素水平及卵巢                           度见表1），并由武汉塞维尔生物科技有限公司合成。
          病理变化的影响，并基于 PI3K/Akt/mTOR 和 PI3K/Akt/                      表1    引物序列及扩增产物片段长度
          GLUT4信号通路探讨补肾强身片的作用机制。                              基因          引物序列（5′→3′）             扩增产物片段长度/bp
          1 材料                                                PI3K        上游引物：AGAGCTTGGAGGACGATGACG  174
                                                                          下游引物：TGGACTGGGCTATCTCACTTCG
          1.1  主要仪器
                                                              Akt         上游引物：CTGGAGGACAACGACTATGGC  215
              本研究所用的主要仪器有 BSA124S-CW 型电子天                                 下游引物：AGCCTCTGTGTAGGGTCCTTCTT
          平（德国Sartorius公司），SpectraMax iD3型酶标仪[美谷              mTOR        上游引物：ACCCTCCATCCACCTCATCAG  218
                                                                          下游引物：CCTGGTCATTCAGAGCCACAAA
          分子仪器（上海）有限公司]，RM2235 型石蜡切片机（德
                                                              GLUT4       上游引物：CCTTCTTTGAGATTGGTCCTGG  160
          国Leica公司），L720R-3型冷冻离心机（湖南湘仪离心机                                 下游引物：CCCATAGCATCCGCAACATAC
          仪器有限公司），YD-6D 型组织包埋机、YD-A 型组织摊                      GAPDH       上游引物：CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG  138
          片机、YD-B型组织烤片机（金华市科迪仪器设备有限公                                      下游引物：GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT
          司），CX23型光学显微镜（日本Olympus公司），StepOne            TM   1.3 动物
          型实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）仪（美国 ABI                            本研究所用动物为健康 SD 雌性大鼠，8 周龄，体质
          公司）。                                               量 180～200 g，购自郑州市惠济区华兴实验动物养殖
          1.2  主要药品与试剂                                       场，动物生产许可证号为SCXK（豫）2019-0002。所有大
              本研究所用的主要药品与试剂有补肾强身片[景忠                         鼠分笼饲养于河南中医药大学医学机能实验室，室温为
          山国药（唐山）有限公司，批号 200502，规格 0.28 g/片]，                20～22 ℃，相对湿度为55%～60%，正常光照，期间大鼠


          中国药房    2022年第33卷第21期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21  ·2633·
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