Page 44 - 《中国药房》2022年21期
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从我国传统中草药卫矛科植物雷公藤中提取得到的五                             科为生物技术有限公司；弗氏完全佐剂（货号7027）购自
          环三萜类化合物 ，具有广泛且明确的抗炎、免疫抑制、                           美国 Chondrex 公司；甲醇、乙酸为色谱纯，无水乙醇、氯
                        [2]
          抗氧化及抗肿瘤活性 。CLT 已被证实对 RA 有显著的                        化钠等试剂均为分析纯及以上级别，水为纯水或屈臣氏
                             [3]
          治疗效果     [4―5] ，其可通过调节中性粒细胞胞外陷阱 和                   蒸馏水。
                                                      [6]
                        [7]
          Th17/Tregs比例 、抑制破骨细胞的形成和功能 以及抑                      1.3 动物
                                                  [8]
                                              [9]
          制成纤维样滑膜细胞的异常增殖和迁移 来治疗 RA。                               本研究所用的动物为 SPF 级健康雄性 SD 大鼠，体
          然而，CLT水溶性差、生物利用度低，且容易产生全身性                          质量为 180～200 g，购于长沙市天勤生物技术有限公
                  [10]
          毒副作用 ，极大地限制了其临床应用。                                  司，生产合格证号为SCXK（湘）2019-0014。大鼠饲养在
              有文献报道，RA 炎症关节特殊的病理生理特征会                         SPF 级环境下，室内温度为（25±2）℃、相对湿度为
          增强炎症部位的血管通透性和炎症细胞的摄取作用，即                           （50±10）%，自由饮水及进食。本实验经贵州中医药大
          ELVIS（extravasation through leaky vasculature and subse‐  学实验动物伦理委员会审核通过后实施（批件号为
                                                       [11]
          quent inflammatory cell-mediated sequestration）效 应 ，  20210070）。
          其类似于肿瘤的强渗透滞留效应。也就是说，粒径适宜                            2 方法与结果
          的纳米粒可以借助RA炎症部位通透性增大的血管向病                            2.1 CLT-AN的处方工艺
          变部位分布，并可在局部炎症细胞的内吞作用下滞留于                                在2 mL混合溶剂[V（二氯甲烷）∶V（乙酸乙酯）＝7∶
          病灶部位，从而实现被动靶向作用。人血清白蛋白（hu‐                          3）]中加入处方量的 CLT 和大豆油作为油相；取处方量
          man serum albumin，HSA）是纳米给药系统的常用载体，                 的HSA，加纯水溶解，得水相；将油、水两相混合，冰浴条
          具有无免疫原性、生物可降解、生物相容性良好等特                             件下超声粉碎，旋转蒸发除去有机溶剂，即得 CLT-AN
            [12]
          点 。事实上，与穿透健康组织相比，白蛋白可更好地                            溶液。
                            [13]
          穿透RA的炎症部位 ，在炎症组织中蓄积，调节其生理                           2.2  处方工艺的优化及确定
                    [14]
          功能和代谢 。基于此，本研究拟使用安全无毒的HSA                               在预实验基础上，重点选取 CLT 投药量、大豆油用
          作为负载CLT的载体，采用超声法制备雷公藤红素白蛋                           量和超声功率为考察因素，以纳米粒的粒径、分散指数
          白 纳 米 粒（celastrol-loaded albumin nanoparticles，CLT-  （polydispersity index，PDI）（测定方法均同“2.3.1”项下）
          AN），通过单因素实验优化处方工艺，并考察该纳米制                           及稳定性[纳米粒贮存在室温条件下析出沉淀的时间，
          剂的理化性质及治疗 RA 的疗效，以期利用白蛋白的炎                          即 T stability （室温）]为评价指标，通过单因素实验优化 CLT-
          症靶向能力和纳米制剂的 ELVIS 效应实现 CLT 在病灶                      AN的处方工艺。
          部位的靶向蓄积，进而为CLT的临床推广提供参考。                            2.2.1  CLT 投药量的考察       固定大豆油用量为 45 mg、
          1 材料                                                超声功率为 490 W、超声时间为 8 min，考察 CLT 投药量
          1.1  主要仪器                                           分别为6、7、8、10、15 mg时对纳米粒粒径、PDI和稳定性
              本研究所用的主要仪器有 Nano ZS90 型激光粒度                     的影响，结果见表1。如表1所示：随着CLT投药量的增
          分析仪（英国 Malvern 公司）、H-600 型透射电子显微镜                   加，CLT-AN的粒径和PDI有增大的趋势，纳米体系变得
         （日本 Hitachi 公司）、1260 型高效液相色谱仪（美国 Agi‐                不稳定；当CLT投药量为6 mg或者7 mg时，纳米粒的粒
          lent 公司）、Axiovert 40C 型倒置荧光显微镜（德国 Zeiss             径、PDI 和稳定性均较好。为保证后期药效实验的给药
          公司）、SB-4200D 型超声波细胞粉碎仪（宁波新芝超声                       剂量，同时考虑 CLT 的用量成本，本研究最终确定 CLT
          设备有限公司）、LQ-C2002 型电子天平（上海瑶新电子                       的投药量为 6.5 mg。
          科技有限公司）、TGL-16B型高速离心机（上海安亭科学                               表1 CLT投药量对纳米粒性质的影响
          仪器厂）、SY501P10 型测厚仪（德清盛泰芯电子科技有                       CLT投药量/mg        粒径/nm         PDI     T stability （室温）/h
          限公司）。                                                6                95.5        0.179       ＞48
                                                               7                97.7        0.188       ＞48
          1.2 主要药品与试剂
                                                               8                109.1       0.369       ＜4
              CLT 对照品（批号 19041101，纯度＞98.0%）购自成                10                117.2       0.407       ＜4
          都普菲德生物科技有限公司；HSA（批号20201021）购自                      15                153.2       0.671       ＜4
          四川远大蜀阳药业有限公司；大豆油（批号H21024303）                       2.2.2  大豆油用量的考察         固定CLT投药量为6.5 mg、
          购自铁岭北亚药用油有限公司；聚山梨酯 80（批号                            超声功率为 490 W、超声时间为 8 min，考察大豆油用量
          437597）购自北京百灵威科技有限公司；大鼠肿瘤坏死                         分别为0、20、30、45、55 mg时对纳米粒粒径、PDI和稳定
          因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 试剂盒和       性的影响，结果见表2。如表2所示：当油相中不加大豆
          大鼠白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA 试剂            油（0 mg）时，无法形成纳米粒；随着大豆油用量的增加，
          盒（货号分别为 CT075A、400-01B-50UG）均购自北京达                  CLT-AN 的粒径减小，稳定性提高。综合考虑大豆油的


          ·2598·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21                                 中国药房    2022年第33卷第21期
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