Page 83 - 《中国药房》2022年20期

溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 2.3.6 相似度评价 应用《中药色谱指纹图谱相似度评
2.3.3 重复性试验 精密吸取“2.2.2”项下编号为 S4 的 价系统（2012 版）》对 13 批归芪通脉合剂样品的图谱进
供试品溶液 6 份，按“2.1”项下色谱条件测定，以芸香柚 行相似度评价。结果显示，13批样品图谱与对照指纹图
皮苷为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留 谱 的 相 似 度 分 别 为 0.983、0.989、0.961、0.990、0.987、
时 间 。 结 果 显 示 ，各 共 有 峰 相 对 峰 面 积 的 RSD 为 0.983、0.988、0.976、0.928、0.986、0.980、0.989、0.985，表
0.13%～3.13%（n＝6），相对保留时间的RSD为0.05%～ 明13批归芪通脉合剂的化学成分一致性较好，整体质量
1.12%（n＝6），表明方法重复性良好。 相对稳定。因芸香柚皮苷的分离度较好、峰面积较大、
2.3.4 HPLC指纹图谱的建立 精密吸取按“2.2.2”项下 峰形和保留时间稳定，故选择芸香柚皮苷为参照峰，得
方法配制的各批归芪通脉合剂供试品溶液，按“2.1”项下 到 13 批 样 品 19 个 共 有 峰 相 对 保 留 时 间 的 RSD 为
色谱条件测定，将所得图谱数据导入《中药色谱指纹图 0.05%～1.94%，说明各批样品共有峰的保留时间较为稳
谱相似度评价系统（2012 版）》，以色谱峰数量及峰面积 定；19 个共有峰相对峰面积的 RSD 为 6.30%～35.33%，
均较稳定的S4样品为参照，采用中位数法，设置时间窗 表明部分成分含量可能存在较大差异。
宽度为0.2 min，经多点校正后进行色谱峰匹配、叠加，得 2.4 HCA
[6]
到叠加指纹图谱和对照指纹图谱（R） 。结果显示，13 以 19 个共有峰峰面积为变量，使用 SPSS 25.0 软件
批样品共有19个共有峰，详见图1。 进行标准化处理，采用 Ward 法以平方欧氏距离为测度
[7]
进行HCA 。结果（图3）显示，当平方欧氏距离为15时，
2 800
2 600 R 13 批样品可分为 3 类，其中 S5、S9、S11～S13 为一类，
2 400 S13
2 200 S12
2 000 S11 S4、S8为一类；S1～S3、S6～S7、S10为一类，提示不同批
1 800 S10
1 600
S9
U/mV 1 400 S8 次归芪通脉合剂样品的化学成分存在差异，推测可能与
S7
1 200
1 000 S6 其原饮片来源差异有关。
800 S5
600 S4 平方欧氏距离
400 S3
200 S2 0 5 10 15 20 25
0 S1 S5
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 S11
t/min
S13
图1 13批归芪通脉合剂样品的HPLC叠加指纹图谱和
S12
对照指纹图谱 S9
S4
2.3.5 共有峰的指认 将编号为 S4 的供试品溶液与混 S8
合对照品溶液的色谱图进行叠加对比后，共指认了8个 S1
S6
共有峰，分别为7号峰（羟基红花黄色素A）、8号峰（芍药 S3
内酯苷）、9 号峰（芍药苷）、10 号峰（毛蕊异黄酮葡萄糖 S2
S7
苷）、12 号峰（甘草苷）、14 号峰（甘草酸铵）、16 号峰（芸
S10
香柚皮苷）、19号峰（橙皮苷）。结果见图2。 图3 13批归芪通脉合剂样品的HCA树状图
500
400 2.5 PCA
U/mV 300 以 19 个共有峰峰面积为变量，使用 SPSS 25.0 软件
200
100 进行PCA。结果（表1）显示，以特征值大于1为标准，筛
0
选得到7个主成分，其累计方差贡献率达到92.115%，表
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56
t/min
A.供试品溶液（编号S4） 明这 7 个主成分可以反映 13 批归芪通脉合剂原始色谱
[8]
500 图中的大部分信息 。旋转因子载荷系数能综合反映各
400 成分对不同主成分的影响，其绝对值越大则成分对主成
U/mV 300 [9]
200
100 分的影响越大 。结果显示，主成分 1 中，16 号峰（芸香
0 柚皮苷）、12号峰（甘草苷）和11号峰的因子载荷系数较
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56
t/min 大，分别为 0.948、0.927、0.745，说明其对制剂质量的影
B.混合对照品溶液
响较大；9号峰（芍药苷）是影响主成分2的主要因子（因
7：羟基红花黄色素A；8：芍药内酯苷；9：芍药苷；10：毛蕊异黄酮葡
萄糖苷；12：甘草苷；14：甘草酸铵；16：芸香柚皮苷；19：橙皮苷 子载荷系数为0.835）；14号峰（甘草酸铵）和7号峰（羟基
图2 归芪通脉合剂指纹图谱共有峰指认的HPLC图 红花黄色素A）是对主成分3影响较大的特征向量（因子

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2505·